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问
SDS PAGE电泳时,蛋白样本含有高盐成分会对电泳产生什么影响?
申东熙老伯
高盐会对条带有影响,拖尾或者条带两边宽中间空心。如果是盐浓度过高的话,电泳的时候可以先用10V电压跑十五分钟,让样品里的盐分离开,然后再80V跑。
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问
细胞状态不好
申东熙老伯
细胞碎片和细胞渣渣可能是传代时候消化时间太久消化过度,缩短消化时间试试。
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问
pcr实验加样走位问题
麻黄连翘赤小豆
加样看你怎么安排的样本,有几个样本,准备多少复孔合适,没有固定的走位,横着竖着都行,加准就行
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问
PCR八连管可以用记号笔做记号吗
麻黄连翘赤小豆
八连管本来就有标记,避免荧光问题,你可以拍照,或者画图在记录本上进行标记
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问
有点急,求助!就一种细胞,就染一个色,阴性组荧光信号值跟阳性一样,并且后面实验组出现了双峰,这是什么原因呢?该如何改进?感谢!!
bamboopiggy
1.你的阴性组是没染的吗?如果是没染的,但是和你的阳性组没有区分的话,说明是你的阳性组没有染上。你最好再找一个比较solid的阳性对照试试,看是不是你的操作有问题。2.后面出双峰,可能是你的细胞的状态有问题的,会分为两群。
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问
BALB/C小鼠背部皮下注射漏液,如何解决呀
bamboopiggy
注射前,先把注射部位的皮肤稍微拽起来一点,然后注射到拽起的皮肤下面
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问
用trizol提组织rna,匀浆后trizol变成红褐色,并且离心之后没出现上层清液是怎么回事
whilt-shirt
trizol加完后要加氯仿振荡后离心才会有上层清液
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问
为什么跑电泳是,每个marker孔的蓝色buffer都有一条竖直的杆?
whilt-shirt
有可能是marker问题,建议更换marker试试
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问
qPCR空白对照水和阴性对照都P出来了,换了机器也还是P出来了,为什么?
12345l6i
体系有污染,或者实验样本浓度太高,加样手法有问题,枪头在pcr管子上面开会晃,污染了其他孔位
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问
WB实验,一抗是单抗,为什么会出现非特异性条带
whilt-shirt
有可能是抗体浓度过高导致的,建议稀释抗体浓度试试
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问
逆转录机器体系忘记更改会影响后续实验结果吗
whilt-shirt
这个个人觉得影响不是很大,其实逆转录就是升温和降温的过程
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问
LPS诱导细胞炎症相关信号通路
bamboopiggy
lps诱导炎症,就必然和一些经典的通路有关系。至于抑制剂,有得公司有mapk抑制剂得library,或者你可以看看FHPI,或TAK-715,都是p38的抑制剂
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问
关于最新研究“铜死亡”
丁香一方
铜死亡是通过铜与三羧酸循环(TCA)的脂酰化成分直接结合而发生的。这导致了脂酰化蛋白质聚集,和铁硫簇蛋白质丢失,进而引发蛋白质毒性应激,并最终致使细胞死亡。FDX1和铜死亡主要依赖于铜的积累!FDX1是蛋白质脂酰化的上游调节因子,FDX1的缺失导致了蛋白质脂酰化功能的完全丧失,及细胞内丙酮酸、α-酮戊二酸的积累与琥珀酸的消耗,表明蛋白质脂酰化功能的丧失阻断了三羧酸循环(TCA)的进行。过量的铜促进
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问
co-ip做的一塌糊涂,为什么孵什么都是一样的
丁香一方
考虑蛋白表达少,看看孵育过程是否存在问题。还有就是整个实验操作是否存在污染
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问
为什么PCR产物跑电泳 胶很乱?
12345l6i
胶没配好,另外缓冲液也有问题,第二块胶出现倒u型,可能缓冲液浓度不对
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问
qPCR内参不整齐是有哪些原因呢?同一个内参的Cq值差值挺大,有的20几,有的30几?
凌晨三点Dxy
常见原因:①排枪与枪头不匹配,结合不严密,导致加样量不足/不均一;②使用排枪吸取内标混合液时,液体堵住了部分枪头滤芯,导致向裂解板加样时加样量不均一,甚至部分孔没有液体加入。解决方案:建议使用配套量程的枪头,移液器要慢放慢吸;分装试剂和加样时仔细观察液体是否打出。
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问
qPCR实验问贴
Eason老歌迷
这是典型的ROX添加不当导致的异常结果,曲线杂乱。大家首先可以尝试去掉ROX分析数据,看一下重复性是否OK(复孔间STD<0.2),如果还是不行,只能下次实验的时候注意千万不要加错ROX。
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问
扩增曲线没有到达平台期可以么,会影响分析么,需要一定有平台期么?
凌晨三点Dxy
起始模板浓度太低,或循环数不够,当然循环数一般参照说明书不会有大问题,而且循环数多了会增加非特异性扩增
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问
qPCR实验重复性较差有什么原因导致?有没有可以的解决办法?
凌晨三点Dxy
1.人:操作不规范,每次实验存在较大人为误差,比如加样,加反应液等定量操作2.机:机器老化,电压电流或卤素灯不稳定(概率小)3.料:试剂耗材质量差,同批次参差不齐。(概率小)4.样:样本质量参差不齐,纯度、抑制物等原因
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问
核酸扩增出现不规则曲线是什么原因?
师医生说
从人,机,料,法,环找下原因:操作流程是否正确,加样孔有无异常,加样中有无气泡干扰,电压是否稳定。该批次重新实验。
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