qPCR实验重复性较差有什么原因导致？有没有可以的解决办法？

1.人：操作不规范，每次实验存在较大人为误差，比如加样，加反应液等定量操作

2.机：机器老化，电压电流或卤素灯不稳定(概率小)

3.料：试剂耗材质量差，同批次参差不齐。(概率小)

4.样：样本质量参差不齐，纯度、抑制物等原因

引物浓度也是影响qPCR实验的关键因素，影响着反应效率和稳定性，建议进行引物优化，可以设置引物梯度浓度实验，寻找最佳上下游引物浓度.

在进行qPCR实验前需要对反应体系的特异性、反应效率、R²、线性范围、检测下限等进行验证，符合qPCR的条件，优化实验。

原因，A. 取材不严格，基因表达往往是有时空特异性的，同一处理下不同的样本取材部位或取材时间不一致会导致检测结果差异很大。 B. 供试材料生长不一或者生物学重复之间处理不一致。

同组的样品用同一个枪尖去上，再就是枪和枪尖要match，所有液体一定要溶解好

操作者的熟练程度，加样的误差是一方面，此外，逆转录酶以及pcr酶反复冻融导致变性也会使结果出现异常