qPCR内参不整齐是有哪些原因呢？同一个内参的Cq值差值挺大，有的20几，有的30几？

常见原因：①排枪与枪头不匹配，结合不严密，导致加样量不足/不均一；②使用排枪吸取内标混合液时，液体堵住了部分枪头滤芯，导致向裂解板加样时加样量不均一，甚至部分孔没有液体加入。

解决方案：建议使用配套量程的枪头，移液器要慢放慢吸；分装试剂和加样时仔细观察液体是否打出。

内参不齐是因为上样的cDNA浓度不一样所致，要想齐，逆转录之前测浓度要准

差异是可以有的，但是如果差太多就不行了!你可以在提完rna，立即测一下浓度，看看是不是降解了。另外是否电泳检测过rna的完整性?可能的原因:1.RNA浓度测不准确2.样品降解3.你实验本身对内参的表达有干扰。

1.RNA浓度测不准确

2.样品降解

3.你实验本身对内参的表达有干扰