有点急，求助！就一种细胞，就染一个色，阴性组荧光信号值跟阳性一样，并且后面实验组出现了双峰，这是什么原因呢？该如何改进？感谢！！

1.你的阴性组是没染的吗？如果是没染的，但是和你的阳性组没有区分的话，说明是你的阳性组没有染上。你最好再找一个比较solid的阳性对照试试，看是不是你的操作有问题。2.后面出双峰，可能是你的细胞的状态有问题的，会分为两群。

有可能是抗体浓度过高了，建议降低抗体浓度试试

实际操作中,如果对样品不了解,前处理不恰当或者分析方法不合理等,会出现峰形不正常的情况,其中双峰现象就是液相色谱中常见的问题之一。出现色谱双峰的原因一般有以下几种原因:色谱柱的问题、溶剂、进样量、样品特性,以及pH。如果在样品分析时发现每个色谱峰都有双峰出现,尤其在采用单一纯物质时,则可以确定是色谱柱出现问题了,一般是柱头受损或者柱头固定相污染引起的。'如果进样量少,原来色谱柱正常,色谱峰的形状多为一大峰带一小峰,不一定拖尾,这一般应是柱头受堵,将色谱柱反过来接,用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂,将堵在柱头的残留物冲掉,再反过来,一般情况下就行了。当然不反冲,正冲有时也会正常的。如果峰拖尾,双峰强弱相差不大,柱头固定相变脏或流失可能性更大,这时可以将进样头拧开,将微孔滤片超声,柱头刮去一部分填料,重新填上新填料拧紧,不过这个对技术要求较高且不能经常做,否则用不了几次,色谱柱就会应柱效降低而报废。如果上述不能解决问题,可能是柱塌陷造成的,此时需要更换色谱柱。目前HPLC分析多为反相色谱,流动相多为甲醇、乙腈、水,加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解,最佳的溶解方法是用流动相溶解。在实际分析中,有时候为了样品的溶解性或稳定性加入了一点的缓冲液,缓冲液的酸碱性可能会导致样品转化,从而产生双峰现象。此时需要更换缓冲液,调整溶剂pH值,或者用流动相配置样品。此外,样品要现配现用,避免样品溶解液的有机相比例、pH值发生变化而导致的溶剂效应。