实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问求助！神经逆向追踪技术？

Eason老歌迷

这个很多人在做，已经很成熟了。我们实验室总用的是电离子渗透导入法。电离子渗透导入法是利用示踪剂分子所带电荷量的大小，通过给予外加电流使示踪剂分子被电场作用力导入至注射部位的一种示踪剂导入方法。通常情况下，人们会将电流直接外加到吸有1-10%浓度示踪剂溶液的微量移液器上，根据电极头直径的不同，电离子渗透导入法除了可以应用于示踪剂的细胞内注射外，还可以应用于示踪剂的细胞外注射。以具体的操作为例，在进行

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问PI染色后流式检测，G2期总是很低或者干脆检测不出来，可能是什么原因

Eason老歌迷

要是g2很低或者是检测不出。细胞经药物处理后无G2存在这很正常，可以考虑为细胞周期阻滞，调节check piont 即可，想进一步分析机制做做Wb，检测那几个周期调控因子。

1 回答729 围观

问做荧光补偿和电压调节有什么需要注意的地方吗？

此用户已注销

调节补偿时，一定要先调节好电压参数，才能调节补偿，补偿调节完成后，电压参数不能改变，若是免调电压的仪器则不必这样

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问在流式实验中如何确定低表达分子的阴阳细胞群

你好几和户

不清楚抗原表达情况的时候，一定要使用同型对照来界定阴性细胞群。

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问做基因多态性时，怎样区分突变型和野生型

Eason老歌迷

野生型是自然种群中最常见的一种，其突变发生于野生型，突变型在自然界中所占比例很小，在自然界中占很少。至于怎么区分，你可以上ncbi上查，就可以查到哪个是突变型哪个是野生型。

2 回答1074 围观

问尤文肉瘤A673在小鼠上能建模成功吗

Eason老歌迷

你是要在小鼠上建模吗？这个可能性很低啊，就是你打进去，小鼠也有免疫系统会多少能杀伤外来异物。为什么选裸鼠不就是因为它没有免疫系统吗

2 回答346 围观

问求助，神经示踪技术，在外周追踪到脊髓，但是到达背根神经节之后就不在逆向向上到达脊髓，有什么试剂或者染料啥的可以做到吗，刚接触这些

Eason老歌迷

神经示踪技术已经很成熟了啊，目前研究中应用较多的逆行示踪剂有：霍乱毒素B亚单位、荧光金、辣根过氧化物酶、固蓝、异硫氰酸盐罗丹明、羰花青染料、荧光乳胶微球、生物胞素和神经生物胞素等都不错，你可以试试。

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问如何在NCBI中上传基因簇序列获得genebank号呢？

Eason老歌迷

你可以打开sequin软件,点击开始一个新的提交(当然您也可以编辑已保存文件);填写必要的信息:title、author、联系方式及机构信息等,后面默认选Next;添加序列:准备FASTA文件,可以选择上传单个序列或者批量上传多条序列:添加必要的序列信息。然后上传即可。

2 回答2176 围观

问qpcr同一样本的三个复孔，A产品八联管做重复性很好，B产品重复性很差，但是师姐用B产品做重复性没有问题，那问题出在了哪

whilt-shirt

有可能是人为操作的差异，建议多次重复

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问请问使用转录组数据call snp，结果里面有内含子可以使用么

Eason老歌迷

可以使用的，包括内含子也可以使用。转录组是整段序列进行转录的，产生的信使rna包括了外显子和内含子的序列。

2 回答492 围观

问同一张PVDF膜上两个不同内参趋势不一样

Eason老歌迷

因为你使用的内参不同，它们的表达量不一样，趋势不一样很正常，而且你只需要做内参内的对比即可，不用做内参间的对比。没有意义。

3 回答474 围观

问求助：包装腺相关病毒

Dr_劉医生

不是必须的，可以用HEK293；先是用常规的方法培养HEK293细胞，传代后24 h后，用购买的Lpotectamin 2000协助重构的质pAAV—MCS及AAV HelpeFreesystem中的其他两种辅助质粒pAAV—RC及pHelper共转染HEK293细胞，培养72 h后，用X—gal染色系统检测质粒转染的效果。用物理方法破碎细胞后，提取病毒悬液，用分光光度仪检测260nm的A值来评价

3 回答730 围观

问求助 227kDa蛋白转膜条件

Eason老歌迷

你这个蛋白太大了，需要延长你的转膜时间和电流，要不然跟本转不上，全留在胶上了。

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问跪求幽门螺杆菌SS1菌株及培养技巧

Dr_劉医生

1. 先将适应菌株SS1和初始菌株10700菌株接种于含50mL/L绵羊全血的哥伦比亚琼脂平板上, 平板中含有两性霉素B 200 mg/L、多黏菌素B 200 mg/L、万古霉素250 mg/L、TMP 300 mg/L. 2. 平板置于50 mL/L O2, 100 mL/L CO2, 850 mL/L N2的微需氧气体环境中37℃培养48 h后3. 取出平板后刮取菌苔, 用8.5g/L的NaC

3 回答481 围观

问蛋白质的免疫沉淀和Western Bloting检测磷酸化的问题？

冷泉港蛋白

如果你是想发现新的磷酸化位点，以基因P53为例，看下文献，它会告诉你怎么做如果你是研究已发现的磷酸化位点，厂家有相应的抗体可以购买。UNIprot 数据库显示了已发现的和预测的修饰位点，你可以看下。文献：Novel homeodomain-interacting protein kinase family member, HIPK4, phosphorylates human p53 at ser

3 回答403 围观

问有淋巴细胞做抗原实验

此用户已注销

可以参考文献Guidelines for the survival bleeding of mice and rats.(2010).

3 回答334 围观

问请问短暂存放组织的液氮放入保温盒，保温盒有什么材质要求吗？普通的保温饭盒可以吗？

申东熙老伯

可以，但是不建议，普通的保温饭盒不密闭的话很危险。

3 回答465 围观

问提取患者标本RNA

illusio

1.用小量提取多处理几个样品，合并后浓缩一下，或者冻干浓缩一下；2.尝试强力裂解液CLB,并且加大处理量，比如加大10倍处理量，然后用几个基因组先清除后，把所有的上清加到一个吸附柱上去，就能提高浓度

3 回答393 围观

问救助|本科科研萌新，纯化的蛋白大小与预期大小不符

冷泉港蛋白

有下面几个原因：1.如果是蛋白降解，在36KD应该有条带，你仔细观察下，看看有没有。比较下未诱导和诱导的差别2.可能是序列中间有终止密码子，你看下测序结果。3.这种分析，最好有图

3 回答541 围观

问请问ELISA试剂盒检测MAC-T饥饿处理后的细胞培养上清，为什么无法计算出酪蛋白浓度？

illusio

对于目的蛋白浓度特别低的样本，可以尝试用高敏ELISA，但这也并不意味着一定能检测到样本浓度，只能说可以提高样本的可测率，并使结果更加可靠。因为通常用普通ELISA检测的样本OD值都偏低，而高敏ELISA可提高样本OD值，使之尽量位于标曲范围内，得到的数值也更加可信。

2 回答181 围观

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