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pDONR221质粒酶切不完全求助
Eason老歌迷
可能是你的酶切时间有些长,因为定性试验,产物的量不甚准确,建议将酶的量做一个梯度,但不是将酶浓度稀释。或者是镁离子浓度可能有些不适合,建议做一下调整。
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问
我想问问CCK8做细胞毒性,不知道药物对cck8有没有反应,然后在空白里面加药,但是我有
Eason老歌迷
主要还是先做几个预实验看看浓度窗,或者你直接去查文献看看前人做的结果,对着结果模仿着进行实验。空白孔就是加了cck8,培养基,没有药物。对照孔cck8,培养基,细胞。
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肝组织冰冻切片免疫荧光
balalaLy
跟阴性对照是有差别的,不过自体荧光有点深了。M1/M2最好是在同一张片子上染,抗体种属来源或者是亚型要有区别才能分得开。但也有文献是分开染的。
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菌株鉴定
Dr_劉医生
写rRNA的转录鉴定结果,而且你上传了NCBI数据库后会分配ID号,到时投稿会用到;至于你说的和全基因组序列的结果不一样,是不是你看的是碱基是DNA的,而鉴定是转录本;还一个确定好sapien还是animals,一般情况不会出现两种菌。
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富集分析结果
Eason老歌迷
不用排序,它直接就是按照相关性排好了,所以直接取前20个做图即可。
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问
皮层神经元聚团放射状长是为什么啊!真的会哭😭,此图片为培养三天的样子,本来好好的那些也会变成这种
Eason老歌迷
你的培养基换过吗,是不是你培养基成分改变了?或者是你传代的原因。
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问
关于负向链启动子构建质粒的问题
Dr_劉医生
当然需要,你用的是反向互补链,而且你启动子选的也是对,一般都是上游+2000bp;双荧光素酶就是得把靶基因插在目的基因前面,然后转录基因才会激活启动子,从而表达荧光素酶基因;
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In-fusion反应液可以直接PCR验证吗
Eason老歌迷
可以!你要是p不出来,可以加点Cloning Enhancer,消除了PCR反应液中引物二聚体和dNTP等的影响试一试,我是可以p出来的。
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求助求助
Eason老歌迷
做过。推荐你酵母表达系统。目前甲醇酵母主要有H Polymorpha,Candida Bodini,Pichia Pastris3种。以Pichia Pastoris应用最多。甲醇酵母的表达载体为整合型质粒,载体中含有与酵母染色体中同源的序列,因而比较容易整合入酵母染色体中。大部分甲醇酵母的表达载体中都含有甲醇酵母醇氧化酶基因一1(A0x1),在该基因的启动子(PAXOI)作用下,外源基因得以表达
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烟草脆裂病毒TRV VIGS求助
Eason老歌迷
感觉是不是你的注射浓度量有点大?刺激到了叶片
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同源重组的引物退火温度该如何计算
Eason老歌迷
退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~知8) 只是粗算,有时不灵,但比道较简便。或者用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好。你的合成引物的单回子上也有个Tm,减去5~8也可。
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问
转录因子结合位点具体包括?
Eason老歌迷
不是啊,结合位点有很多,你可以用软件去预测。打开网址:https://jaspar.genereg.net/,在搜索框里输入转录因子NFAT,点击Search。选择一个或多个ID文件,在SCAN序列框中输入FASTA格式文件,得到27条转录因子NFAT与IL17A的结合位点,Strand -没有特殊意义,选择Strand +即可。JASPAR数据库检索出的结合位点来源于已发表的ChIP实验等,主要
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问
各位科研大佬们帮我看看,有没有自噬小体或者溶酶体
Eason老歌迷
看着这几个大泡有点像里面有自噬小体存在。
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大鼠主动脉平滑肌细胞形态是否正常
Eason老歌迷
看着有点老化,你可以减少传代消化次数,消化次数多了,对细胞也是一种损害。
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脐静脉内皮细胞 淋巴管内皮细胞
Eason老歌迷
因为淋巴管它不能繁殖。而脐静脉内皮细胞是一种干细胞,能无限次传代,易于实验操作。
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悬浮细胞培养
whilt-shirt
是不是离心的温度高了,一般都是选择4℃离心
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胰腺HE染色
Eason老歌迷
看着像是胰岛,你可以再做几次染色看看。
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实验求助
Eason老歌迷
你可以加碱,这样可以增加中链脂肪酸的水溶性。
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HKC不好养
Eason老歌迷
你是不是细胞传代的时机不对,导致细胞老化死亡,或者是你的消化时间太长了。
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人鼻上皮细胞气液分离培养
Eason老歌迷
看过两篇文献,讲过怎么培养”人鼻息肉上皮细胞的气液界面培养”,”鼻粘膜上皮细胞培养方案的优化及评估”
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