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        qPCR熔解曲线都是乱的,荧光信号强度也不高,9个孔4个过不了阈值没Ct,为什么?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        地包天松鼠

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        4 个回答

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        n0y0j7

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        qPCR引物和普通pcr不同,你的引物是否正确?

        还有软件设置,是否正确?

        试剂和仪器兼容吗?

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        Eason老歌迷

        有帮助

        可能是反应体系污染,结合NTC和NRC结果确认污染情况,建议从水,引物,酶和环境等逐一排除污染。也可能是试剂暴露在强光或高温下导致试剂失效,建议用新的试剂做对比实验。或者是仪器长时间未校准,建议定期进行仪器校准保养可能是。耗材与仪器不匹配,需确认对应仪器对耗材的要求。

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        Topmicro

        有帮助

        大概率是引物问题,再设计一对试试

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        bamboopiggy

        有帮助

        1.要么是你的机器有问题了,2,要么就是你的酶有问题了,3,就是所有引物都是你新设计的,没有用过,4,你的cDNA降解了。

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        地包天松鼠user-title

        还有其他可能吗?机器是我学姐昨天刚用的,酶也是昨天刚用的,pcr产物测过序了,cDNA也是最近一个月提rna反转录出来的,这些都不大可能有问题

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