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问
投稿时,qPCR有数据不是很完美会被拒稿吗?
yanlai000
内参35???重新提RNA吧,完了测浓度
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问
琼脂糖凝胶电泳
illusio
可能是制胶时带入了杂质,形成了障碍物,使得条带电泳时受到阻碍无法继续电泳,从而形成扭曲。或是制胶时溶胶不完全以致琼脂糖颗粒残留,形成一些浓度较高的区域,在DNA电泳经过这些区域时,部分DNA被阻碍在这里
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问
细胞长满但是提的RNA浓度低
陈皮712
RNA的质量还行,浓度偏低,但这个浓度也可以继续往下做。不知道你是用Trizol法还是柱法,如果是柱法提取,RNA浓度会比较低,但纯度会更好。Trizol法提取RNA的浓度会比较高,但杂质也相对较多。Trizol法用得更多一些。首先,加入Trizol后,T25瓶的细胞倒掉培养基,不用PBS清洗,直接加0.8-1ml Trizol,铺瓶,放4度冰箱充分裂解10分钟。然后,开一把新的细胞刮刀,充分刮,
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问
western膜的保存 strip心得 显多个蛋白
balalaLy
我自己的习惯是保存在tbst里边,一个星期内是可以的,我课题组有个博后是把条带放吸水纸上弄干然后用保鲜膜封起来,说是以后需要补实验的话可以再拿来用,她博士阶段经常这样做,是可行的
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问
(求助)WB条带分析
麻黄连翘赤小豆
封闭没封好,都是奶粉颗粒一抗特异性不好,建议选择单克隆抗体
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问
目的条带先胶回收再双酶切还是双酶切再胶回收
balalaLy
先少量跑胶验证目的条带是否存在,如果条带单一,可以直接用剩下的做双酶切
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问
请问我这个是什么情况,敷上一抗以后膜上目的条带的位置可以看见灰色条带,但是扫膜看不到目的条带(内参没问题)
whilt-shirt
有可能是二抗的问题,建议重试。
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问
这是我跑的ERK和p-ERK,是要加大蛋白上样量吗,还是减少?
balalaLy
蛋白量没有问题,增加点可能更好。条带有点弥散,可以用好一点的loading
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问
LAMP引物设计过程中出现300多条,如何进行筛选?
Eason老歌迷
300多条引物?你就从gc含量,从产物长度,从有无二聚体产生,有无错配等筛选,肯定合格的就少了
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问
如何检测耗材上的DNA酶和RNA酶
illusio
一般用PCR检测,电泳基本检测不出来
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问
qPCR怎么会有这种扩增曲线?
秋秋欣欣
机器没问题的话,应该是环境有污染了,或者你的试剂有污染
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问
提取RNA扩增后质控起不来内标也起不来
Topmicro
检查一下用的引物是不是有问题。
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问
关于免疫细胞培养的问题
麻黄连翘赤小豆
这是贴壁细胞,可以胰酶消化,但要注意消化时间,细胞株的话消化1-2分钟,原代的话就要消化久一点
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问
免疫组化一抗稀释液
bocardio5927
同一试验尽量选择同一种,减少实验误差,毕竟如果实验结果不稳定,找原因也是很麻烦
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问
有人遇到杂志需要提供使用动物的知情同意声明吗?
Topmicro
写明来源还有提供伦理证明应该就可以了。
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问
关于IL-2冻干粉的处理
麻黄连翘赤小豆
可以直接加入培养基,但之后需要进行超声如果溶解不了的话。加BSA保存还是要看说明书,每个商家可能保存条件不一致
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问
差异基因没办法富集到通路怎么办?
陈皮712
换一个数据集试试,有时候GSEA的数据集不一定是最新的。另外,也很有可能,这些差异基因,就是没办法通过GSEA富集的。也就说它们的确存在差异表达,但不能整体地调控某条通路。
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问
悬浮细胞甩片做免疫荧光染色
yanlai000
普通显微镜下可以看到的话那可能是共聚焦显微镜使用不熟练导致,共聚焦的Z轴比较精准,先低倍在白光下找到细胞,然后再高倍找,找到细胞后再打开激光观察,注意记录Z轴的数值方便下次快速聚焦
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问
请问肾脏组织做流式细胞术样本怎么处理呀?怎样制成单细胞悬液?
Eason老歌迷
选取合适的肾脏组织。选好的酶溶液1~2ml加入盛有被消化组织的试管中。 常规消化20~30min(恒温37℃或室温),消化期间间断振荡或吹打。 终止消化,收集细胞悬液,以300目尼龙网过滤,除去细胞,低速离心除去细胞碎片。加入PBS2ml充分混匀,离心弃掉上清。再加入0.5mlPBS重悬细胞。将制备好的单细胞悬液进行荧光标记后上机检测或保存备用。
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问
qPCR内参ct值偏低(小于15,12、13左右),而目的基因ct值正常
yanlai000
建议稀释5倍(样品:无酶水=1:4),这样理论上Ct值增大2.3
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