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问
(细胞焦亡)为什么wb做活化caspase-1大多在上清中做?
土井挞克树
考虑是上清中含有活化所需蛋白。细胞裂解中也有,但是大部分存在于上清
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问
miRNA转染RSC96细胞
土井挞克树
可以参考刘玉璞的《。 三种转染试剂对RSC96细胞miRNA转染效率及细胞毒性影响的比较》
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问
trizol法提RNA浓度低的问题
土井挞克树
首先考虑是不是细胞浓度太少,如果不是是否降解太多
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问
外泌体浓度
土井挞克树
我们实验室的是这样做的,提取后的外泌体用PBS重悬,取50ul,直接加入20-30ul的RIRP-PMSF(100:1)裂解液,其余步骤同裂解细胞测蛋白一样。上机测蛋白浓度的时候,可以不加up水(或PBS)稀释十倍,而是直接加20ul的裂解上清,否则可能会浓度太低测不出
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问
共聚焦激发光问题求助
土井挞克树
是的,你设置激光光源为一个就可以了。
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问
gallios流式细胞仪
土井挞克树
细胞群重叠,设置问题,死细胞群没有分离出来,才会出现象限重叠
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问
干细胞小鼠畸胎瘤实验请教
土井挞克树
是的,浓度太高或者你打的位置不对
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问
求助:大鼠MCAO模型,颈内颈外傻傻分不清楚
土井挞克树
很显然粗的是颈外,另外一条是颈内
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问
裸鼠肠癌细胞皮下成瘤HE染色
土井挞克树
观察间质内有没有肿瘤,倍数放大,这个倍数看不清
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问
动物模型
土井挞克树
小鼠解剖比较局促,你可能结扎错了动脉
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问
小鼠爪子做病理
土井挞克树
做皮疹吗?可以把皮疹内积液祛除,然后观察皮疹组织
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问
请问各位大佬,GPX4和keap1相比,那个用wb检测更好跑一些呢?做小鼠肾组织的。
土井挞克树
一般来说GPX4用的多一些,尤其是肾组织
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问
【求助】免疫荧光竞争法中检出限的计算方法和原理学
土井挞克树
检测限(limit of detection, LOD)定义: 在样品中能检出的被测组分的最低浓度(量)称为检测限,即产生信号(峰高)为基线噪音标准差k倍时的样品浓度,一般为信噪比(S/N)2:1或3:1时的浓度,对其测定的准确度和精密度没有确定的要求。目前,一般将检测限定义为信噪比(S/N)3:1时的浓度。 计算公式为: D=3N/S (1) 式中:N——噪音; S——检测器灵敏度;D—
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问
CAR-macrophage中BMDM的消化问题
土井挞克树
试用一下加利多卡因的消化方法。
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问
免疫荧光封片后干片问题
balalaLy
干片会对染色效果有影响,但如果是染完一抗二抗最后面的步骤干片,不至于会完全没有阳性染色。
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问
FITC单染管调补偿
土井挞克树
单染管作为对照,补偿调节样本必须可染出一群强阳性(或一群阳性和一群阴性),以比较它们之间的平均荧光强度,这样补偿调节方可准确。
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问
小鼠腹腔注射1mg/kg,怎么配成注射的溶液体积?
bamboopiggy
先看你药物的说明书,只要你药物的干粉可以放-80,你用dmso溶解后,就可以放-80
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问
细胞污染了吗
申东熙老伯
污染了,细胞培养基很脏,可以观察一下培养基,培养基混浊就是污染。
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问
wb做出来的内参为啥是这样的,一抗加了15000:1,二抗也是15000:1,图一是GAPDH,图二是his3
申东熙老伯
his3看着还可以,内参背景脏可能是没封闭好,建议封闭的时候一张膜一张膜分开封闭,避免让两张膜叠在一起,洗膜的时候也是。
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问
TRIZOL法提RNA浓度低
Dr_劉医生
RNA浓度低可能的原因:提取样本过低总量不足或者提取样本过多裂解不彻底;Trizol法提取时,分层后吸取上清时吸到中间层会带来严重的基因组污染;分层吸取时应当格外小心,不要吸取到中间层;可能是提取样本本身降解,或者是在提取过程中导致的降级;应当尽可能使用新鲜样本进行RNA提取,采集的样本应当及时置于液氮或者-80℃冰箱冻存,并减少反复冻融。盐及有机溶剂残留
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