实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问百分之10的福尔马林固定心脏在室温下能保存多久？

loveliufudan

如果将心脏置于百分之10福尔马林固定液中，在室温下保存的时间会根据心脏的大小和福尔马林的渗透速度而异。一般来说，一个小的心脏在福尔马林中的固定时间可能只需要几天，而一个大的心脏可能需要几个星期或更长时间。通常，建议将样本放置在室温下至少48小时，以确保完全固定。但是，具体保存时间取决于固定液的浓度、样品的大小和厚度等因素，因此最好根据具体情况进行调整。同时，应当注意，福尔马林是一种有毒的化学物质，

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问请问商品化长期储存在-20°的多聚甲醛对细胞进行固定时会因为时效导致浓度改变等问题，导致对细胞通透性

秋秋欣欣

不会，多聚甲醛在-20可以保存很久

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问光源控制单元ERR显示红灯什么意思？对观察有影响吗？怎么解决？

huarenqiang5

应该是程序或电源的问题。复位一下，检查电源是否达到最低工作电压或重新启动程序。

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问western blot 相关实验

huarenqiang5

考虑以下几点原因：①. 因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整，如Enlight-plus。②. 蛋白没有充分转移到膜上。转膜后可通过预染Marker判断转膜效率，也可用丽春红染膜、用考马斯亮蓝染胶，判断转膜效率。③. 抗体效价不高，用量不足，孵育时间太短，或抗体反复使用保存不当而失活。可考虑更

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问COIP实验中INPUT无目的蛋白，pulldown中能砸到目的蛋白，why？

huarenqiang5

主要考虑以下几点：（1）样品中目的蛋白未表达或者表达量低。这种情况下建议确定目的蛋白的蛋白谱，确定它会表达。（2）可以适当增加裂解液，但要注意后续要将裂解液去除干净。（3）抗体使用量少，没有足够的抗体去捕获目的蛋白。建议增加抗体的使用量。（4）缓冲液、洗脱液的pH可能不能将目的蛋白洗脱。建议根据想要洗脱的蛋白质，调整溶液正确的二pH值。（5）抗体没有与免疫吸附磁珠结合。注意查看磁珠与抗体亚型是否

4 回答972 围观

问流式细胞仪是否能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少？

土井挞克树

可以用流式加荧光的方法做，荧光强度可以定量

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问求问为什么我配10%SDS溶解不了我是2g加20mL纯水，65℃加热一直无法溶解?

土井挞克树

增加温度，可能你的试验中杂质过多

3 回答2499 围观

问求助各位大神，我已经做了三次血清提取RNA了，每一次的OD260/280还有260/230值都很低

huarenqiang5

这个情况主要考虑以下几点误区：1.认为4度离心很好，其实4度离心只有坏处，没有好处。2.误认为提取RNA/DNA不用跑电泳，只要测OD吸光值/OD比值就可以知道浓度和纯度。核酸纯化，大家最大的误解，就以为测出来OD值吸光值就是测出来了核酸的浓度，这个概念是不对的。测OD值，只是测总吸光值，它不能等同于测的是真实核酸浓度。总吸光值可以来源于真正的核酸，也包含来源于残留的杂质，残留的蛋白，残留的降解的

3 回答7420 围观

问求问关于质粒转酵母的问题

huarenqiang5

考虑问题出在质粒上，首先需要对质粒进行电泳检测，电泳结果需为大小正确且明亮的条带；其次核对筛选培养基的选用和配制是否正确；排除上述因素，就需要复查酵母菌的外观气味是否正常，或者进行镜检。

3 回答1144 围观

问小鼠测生化指标前，前一晚是否需要禁水？

土井挞克树

需要的，排除喝水后对酶代谢的影响。

3 回答2429 围观

问有关皮下成瘤问题请教

土井挞克树

建议分组后再给，这样可以排除环境的差异，先等足够分组再给药

3 回答771 围观

问类器官病毒包装进行稳转后续不需要药筛吗？

土井挞克树

稳转后不需要做药物筛选了，前期做就可以了

3 回答163 围观

问单纯的神经元细胞会分泌炎症因子吗？

sswei

单纯的神经元细胞不能分泌炎症因子。

4 回答1036 围观

问抗体的储存：把抗体往低温放了

土井挞克树

短期低温我们影响不大，时间长的话有可能变性

3 回答954 围观

问腹水制备

土井挞克树

不建议，清洁级别是不承认的，你后续投稿都会受影响

3 回答417 围观

问流式肺组织巨噬细胞

土井挞克树

不一定完全用抗体圈出巨噬细胞才可以，得出比例经过计算也是可以成功的

3 回答1954 围观

问碱性氨基酸转移到蓝藻与大肠杆菌上

土井挞克树

可能性不高，真菌与动物的转导通路没有共同性，动物的酶通常不适用于真菌。

3 回答279 围观

问相同的药物和通路，不同的细胞算创新吗？如果要验证药物创新的话

juyue2010

不算，老药新用，需要有新的适应症

3 回答519 围观

问请问一下，问什么蛋白表达中，集菌破碎之后，液体是黄色的，而且过完分子筛之后，跑胶之后，条带还是很杂？

loveliufudan

蛋白质表达过程中，液体颜色的黄色可能是因为存在大量的细胞裂解产物或者富含色素的蛋白质。条带杂乱的问题可能是由于目标蛋白质表达量较低，或者存在其它杂质蛋白质或者表达产物。为了解决这些问题，您可以考虑以下几点：优化菌落培养条件以提高目标蛋白质表达量。在破碎细胞时使用更加彻底的方法，如超声波或高压均质等方法，以确保细胞完全破裂释放蛋白质。使用更加纯净的蛋白质分离方法，例如磷酸盐缓冲液（PBS）或甘氨酸盐

5 回答477 围观

问请教各位转染CRISPR文库慢病毒的问题

juyue2010

对于每一种细胞，都有自己合适的MOI，这里说的0.3MOI是指病毒感染后30%细胞阳性。

5 回答486 围观

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