实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问人脐静脉内皮细胞细胞培养问题。

土井挞克树

看着像是细菌污染，应该立即消毒杀菌

3 回答410 围观

问免疫荧光标本使用问题？

loveliufudan

理论上是可以对已经做过GOIGI-COX染色的小鼠大脑切片进行免疫荧光染色的，但需要注意以下几个问题：确保样本没有被破坏：GOIGI-COX染色可能会影响切片中的某些组织结构，因此在进行免疫荧光染色之前，需要检查该样本是否还能够进行下一步的处理。免疫荧光染色前需要进行脱染步骤：GOIGI-COX染色可能会掩盖某些特定的免疫染色信号，因此在进行免疫荧光染色之前，需要进行一定的脱染步骤，以确保免疫染色

1 回答213 围观

问条件性敲除小鼠没有办法着床，如何确定子宫中胚胎的位置呢？

sswei

可采用3维成像技术来确定未着床子宫中胚胎位置。

2 回答276 围观

问什么是析出沉淀制备混悬液？

土井挞克树

就是原本用水溶的更换醇溶，更换溶剂后溶解度会改变

3 回答349 围观

问pcr，加大模板后，条带亮度没有变化(不怎么亮)，这时候要从哪里入手呢?已经跑过温度梯度了，选择了最亮的那个温度。

土井挞克树

从抗体入手，没有亮度考虑是抗体的特异度不够

3 回答398 围观

问胶乳增强免疫比浊试剂稳定性的相关问题

土井挞克树

先把沉淀去除，用上清液再观察七天。

3 回答1497 围观

问 pull down实验使用的细胞不同会对实验有影响吗

土井挞克树

会有影响的，建议用同一种细胞，不然统计学上就会引起质疑

2 回答317 围观

问WB条带很丑，而且还是皱眉条带?

土井挞克树

蛋白的浓度太大，而且ph也需要调节

3 回答688 围观

问切片用H2O2处理的目的是什么？

sswei

为了去除过氧化氢酶，影响DAB染色。

3 回答1047 围观

问我的组织就是肝组织，含有很多内源性的生物素，由于亲和素会与生物体内的内源性生物素反应，从而有非特异性着色，如何解决？

sswei

封闭内源性生物素：将组织切片用0．0l％亲和素溶液室温处理10～20分钟，使其结合位点饱和，以消除内源性生物素的活性。也可购买生物素阻断剂试剂盒，其中A液为亲和素．B液为生物素。使用时加A液l滴，室温10分钟，PBS冲洗3次，每次2分钟；加B液1滴。室温10分钟．PBS冲洗3次，每次2分钟。

2 回答286 围观

问请问WB检测培养基里面分泌蛋白的表达量，可以用什么内参？

土井挞克树

可以用actin做内参，比较稳定

2 回答681 围观

问为什么质粒转化涂平板前要离心

土井挞克树

涂板前要离心进行纯化，把杂质去除。

3 回答681 围观

问大佬们，southern blot 结合标记探针为什么还要染色

sswei

EB染色剂可以用来检测单链或双链核酸(DNA或RNA)。但是染料对单链核酸的亲和力相对较小,所以其荧光产率也相对较低。

3 回答383 围观

问一个抗体做WB和IP没问题，条带很强，但是IHC没信号。而且我做IHC时同步做了另一个抗体的，信号很强，可能的原因是什么呢？

sswei

无信号-阴性结果1、真阴性结果：组织或细胞不表达抗原，无法检测到相应信号;或抗原表达量太低，无法检测到相关信号。2、假阴性结果（1）免疫组化染色前错误：切片时选错蜡块和拿错切片，这种情况可用H&E染色验证。（2）免疫组化染色操作错误：①确认是否忽略了应加的某种试剂，包括一抗抗、底物等。②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否在足够的温度条件下解音了足够的时间。③复查抗体的标签确认是否使用

4 回答377 围观

问常见的胃癌细胞株的种类和区别

balalaLy

胃癌细胞株的分类主要包括以下几种：一、普通人胃癌细胞株，如NCI-N87、CRL-5822。二、低分化胃癌细胞株，如BGC-823、RPMI-1640。三、未分化人胃癌细胞株，如HGC-27等

3 回答8423 围观

问求助免疫荧光实验的问题？

心细北方

用PBS多洗几遍应该好一些，楼主可以试试！

5 回答913 围观

问GraphPad prism软件计算IC50数据处理问题

loveliufudan

GraphPad Prism是一款常用的统计分析软件，可以进行不同类型的数据拟合。在拟合曲线时，常用的方法包括不拟合、三参数、四参数和五参数拟合。下面是这些方法的简单介绍和使用场景：不拟合如果数据本身不需要拟合曲线，那么可以选择不进行拟合。例如，对于一些分类数据或者纯粹的描述性统计数据，可能不需要进行拟合。三参数拟合三参数拟合通常用于拟合带有截距的曲线数据，其方程形式为：Y = Bottom +

3 回答3905 围观

问请教病人组织蜡块切片后存放在条件

申东熙老伯

切片最好放在四度冰箱，两三个月应该是没问题的。

4 回答2376 围观

问本人想做一味药的化学成分在大鼠组织组织分布，请问取脑的话是取大鼠脑的哪个部位呢?

huarenqiang5

这种情况可以取全脑组织进行分析比较好，可以了解不同的脑组织是否存在差别，这样更利于分析具体情况。

4 回答352 围观

问小鼠模型不同组略微改动差别就不一样

dxy_x9agut5r

增加一下样本量，取平均值，这样能减少一下误差，最终实验结果就不会波动太大

4 回答337 围观

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