实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问各位大佬，胫骨怎么提取rna啊。

huarenqiang5

可以借鉴以下步骤和方法：小白鼠6只，雄性，4周龄，体重20-30 g。采用脱颈法处死，迅速解剖剥离双侧胫骨组织，用生理盐水冲洗干净，放于液氮中保存。1.骨RNA提取第一组(对照组):随机称取25 g的骨组织3份，在标准条件下用传统Trizol法一步裂解，氯仿纯化、异丙醇沉淀、乙醇再纯化，干燥后得到3份RNA沉淀，每份加入10uL DEPC水溶解。第二组(改良组):随机称取25g的骨组织3份放入2m

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问做的胶体金试剂放久了会出现色浅？主要是什么原因？

huarenqiang5

主要原因有：1.被标记蛋白液中含有过高的盐离子。2.T线包被的抗体或者抗原的量过低或者提高胶体金的标记量过低。3.样垫的PH值，PH值越低，颜色越深，所以，包被液的PH值和胶体金标记的PH值也可以降低一下。4.使用胶体金颗粒的大小不合适，颗粒越大，颜色越深，但是，特异性会变弱。

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问有哪些因子参与免疫球蛋白的类型转换？

huarenqiang5

主要有Th1细胞因子IL-2、IL-12、IFNγ；Th2细胞因子主要是IL-4、IL-5、IL-6、IL-10参与免疫球蛋白的类型转换。

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问像VH2-1具体是什么意思，重链可变区，那2-1是什么含义呢？

loveliufudan

“VH”表示重链可变区（variable region of heavy chain），“2”表示第二个可变区域，而“1”则可能表示第一个亚区（subregion）。重链可变区是免疫球蛋白分子中一个重要的区域，可以影响抗体与抗原的结合特异性和亲和力。

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问VH基因家族包括什么？其临床意义是什么

loveliufudan

VH基因家族是免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）的重链可变区（VH）基因的一个家族，其中包括了多个互相关联的基因。这些基因编码重链可变区域，这是Ig分子的一部分，也是抗体的可变部分，负责与抗原结合。VH基因家族是高度多样化和可变的，以便Ig分子可以结合到各种各样的抗原上。人类VH基因家族被分为7个亚家族（VH1-VH7），每个亚家族包含了多个基因。不同的VH基因家族在其序列和结构方面

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问请问这种泳道内部背景很黑是啥原因呢？跑了好几次都这样😭抗体是新配制的，用的是半干转20伏28分钟

sswei

背景黑可能有以下几个原因:1.没有封闭好,但这个可能很小2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长

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问关于IG转录的一些转录因子有哪些？作用是什么？

土井挞克树

给你分享一张图片，上面有转录因子及作用

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问IG的V（D）J模式是跟基因重排相关吗，原理是什么？

土井挞克树

3 回答510 围观

问热蛋白组学实验裂解细胞，可以用Rapigest SF吗？

土井挞克树

裂解剂一般还是要选择NP-40，Rapigest SF注意作用是表面活性剂，增强表面活性

3 回答587 围观

问序列正中间有个polyA尾会影响PCR扩增嘛

土井挞克树

可以分段扩增，把polyA的位置固定在尾侧

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问提质粒时最后一步加Elution Buffer洗脱，如果没加好加到壁上导致最后的质粒少，会有什么影响吗？可以在离心前多加EB吗？

loveliufudan

如果在提取质粒时未将Elution Buffer彻底加入壁上，可能会导致一些未被溶解的DNA残留在壁上，从而导致纯化后的质粒DNA量减少。在离心前添加更多的Elution Buffer可能会有所帮助，但是需要注意的是，如果添加过多的Elution Buffer可能会导致质粒DNA的浓度过低，从而影响后续实验的结果。因此，建议在离心前仅添加足够的Elution Buffer以确保所有DNA都被溶解并

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问免疫荧光实验，阳性细胞数如何计数？

土井挞克树

阳性细胞计数为单位面积下阳性细胞数，你所说的是平均个数，还要计算面积（如1个高倍视野面积是多少平方），个/平方毫米，这样数据才有可比性。imagej可以计数，imagej很强大，很有用，希望大家共同学习，共同提高。

3 回答7621 围观

问一段rDNA介导的外源基因整合到酵母基因组可以重复多次整合基因吗

土井挞克树

可以的，但是随着整合次数的增多，整合的成功率就会降低。

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问药品的防霉实验怎么做

土井挞克树

孢子悬液可以直接接种在PDA平板上实验

3 回答334 围观

问小鼠免疫相关问题求教

洛噜啦噜啦嘞

首先，细胞免疫效果取决于抗原。正常情况下皮下接种，背部皮下即可。接种成功，其实，我们看的是一段时间之后，接种位置处是否出现溃烂，即表明有炎症产生，当然，并不是所有的免疫接种都会出现这种情况。

4 回答363 围观

问水痘减毒活疫苗病毒裂解的相关问题

土井挞克树

增加裂解液Triton X-100 的浓度

3 回答378 围观

问免疫组化病理切片扫描后可以使用image J软件可以一次性计算整个切片光密度值吗，如何计算，有什么规范吗？

土井挞克树

免疫组化病理切片扫描后可以使用image J软件计算整个切片光密度值，但是不可以一次性，把image J扫描后进行光密度选择然后计算。

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问做免疫荧光时用到的免疫电镜的相关问题？

sswei

是为了更好地观测到DNA分子的超微结构。

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问请问纯化得到表达的VLPs要做透射电镜观察，铜网，应该准备哪些材料，方法步骤，小白第一次做电镜

loveliufudan

以下是纯化表达的VLPs进行透射电镜观察的一般步骤：材料：纯化后的VLPs样品碳膜覆盖的铜网（200-300目）纯化水步骤：将铜网放置在纯化水中，轻轻地用镊子夹住铜网的边缘，在水面上晃动几次，使其上下浸润一下水，去除表面的杂质。用极少量的滴管吸取纯化后的VLPs样品，滴在铜网上，让其自然干燥。在干燥前，可以用滤纸轻轻地吸干铜网周围的水分。将样品处理后的铜网放入透射电镜中，进行观察。观察前要先对电镜

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问这个图换一个表达样式可以怎么画？

sswei

可以做一个硫酸浓度变化反应趋势动画图。

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