求问大神角膜上皮细胞怎么提取，培养？

培养基：无血清角质形成细胞培养液，添加0.15mmol/L 钙、0.1ng/ml 人上皮生长因子、5mg/ml 胰岛素、0.5mg/ml 氢化可的松和30mg/ml 牛垂体提取物；MEM；PBSA；胎牛血清

鼠角膜上皮细胞提取物是从鼠原代角膜上皮中提取的，从正常大鼠眼组织制备，可以直接用于基因克隆及各种分子生物学实验的研究。收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。

　　细胞提取物的冻存：

　　1、鼠角膜上皮细胞提取物规格在高细胞浓度情况下进行培养细胞的冻存，并且细胞传代次数尽可能少。确保冻存前细胞的活性至少为90%，请注意冻存条件取决于所用细胞系。

　　2、细胞应缓慢冷冻，可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器使温度每分钟大约降低1°C。

　　3、必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO或者甘油等冷冻保护剂　　

　　4、将冷冻的细胞于-70°C以下温度储存；温度高于-50°C时，冷冻的细胞将开始变质。

　　5、必须使用无菌冻存管储存冷冻的细胞。装有冷冻细胞的冻存管可浸于液氮或者在液氮上方的气相空间内保存

　　6、必须穿戴个人防护设备。

　　7、所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术，并且在层流通风橱内进行。　　

　　对培养的鼠角膜上皮细胞进行冻存的方法是将细胞置于含有(DMSO)等冷冻保护剂的完全培养基中于液氮中储存。冷冻保护剂可降低培养基的冰点，并可减缓冷却速度吗，大大降低冰晶形成的危险(冰晶可损伤细胞，导致细胞死亡)。

提取角膜上皮细胞通常需要进行角膜刮取或酶解方法。其中，角膜刮取是一种比较简单和常用的方法，可以通过医用刮刀或角膜扫描仪在局部麻醉下采集角膜上皮细胞。酶解法则是将角膜切成小块，使用特定的酶消化角膜基质，最后筛选出角膜上皮细胞。

在成功提取角膜上皮细胞后，可以通过将其进行培养来扩增和维持其生长状态。常用的培养基有多种，常见的是Keratinocyte-Serum Free Medium (KSFM)和EpiLife medium，其中KSFM含有角质形成细胞生长所需的各种营养物质和激素，而EpiLife medium则是为了更好地模拟角膜上皮细胞在自然环境下的生长而开发的培养基。