实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问分离胶百分之15，浓缩胶选多大的呀，

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浓缩胶一般都是5%的,下面的是5ML的配方,其余的你可以自己算了5mlH2O 3.6acrylamide mix（30%） 0.621M Tris(PH6.8) 0.6310% SDS 0.0510% AP 0.05TEMED 0.005

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问ACTA PHARMACOLOGICA SINICA多久送外审呢

土井挞克树

一般两个月左右送外审，外审时间一个月左右

1 回答236 围观

问做克隆基因时，明明蓝白斑都有，而且做菌液PCR也有条带，为什么老是测序失败啊

loveliufudan

尽管您看到蓝白斑和PCR条带，但是测序失败可能有多种原因，例如：质量问题：测序需要高质量的DNA样本，而低质量或受到污染的DNA样本可能会导致测序失败。您可以尝试使用纯化和质检DNA样本的方法来解决此问题。序列重叠：如果您的目标基因有高度相似的序列或存在同源基因，这可能导致测序失败或难以解析。您可以尝试设计更特异性的引物或使用高通量测序技术来解决此问题。测序仪问题：测序仪的性能或参数设置可能会影响

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问为什么建议尽量用RFP而不是GFP来检测体内发光?

loveliufudan

原因如下：细胞自发发出的荧光干扰较少：在体内检测荧光时，经常会遇到背景荧光的问题，这是因为组织本身会发出一些自发的荧光。而RFP荧光波长较长（约610nm），在组织中穿透力较好，因此相比GFP，其检测到的自发荧光较少。RFP和GFP的荧光重叠较少：由于RFP和GFP的荧光波长不同，它们的荧光重叠较少，可以避免混叠信号的影响，提高检测灵敏度和准确性。RFP抗光照性能更好：在实验过程中，组织可能会暴露

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问标记的肿瘤接种以后，会发生 Luciferase 的丢失吗?

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没有正式的报道丢失Luciferase的情况。丢失的可能性及量非常小，不会影响实验结果。一些实验报道的结果中，标记的细胞在动物体内存活几年的时间还可以持续发光，说明Luciferase基因的标记非常稳定。

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问在体外的细胞培养中，为什么要经常用抗生素筛选?

loveliufudan

以下是抗生素在细胞培养中的几个应用场景：预防污染：在进行体外细胞培养时，细胞容易受到来自外部环境的微生物污染，使用抗生素可以预防细菌、真菌等微生物的污染，保证细胞培养的纯度和健康状态。选择抗性细胞：在体外细胞培养过程中，有时需要筛选出抗生素耐受的细胞，以便在后续实验中对其进行进一步的研究，如筛选含有特定基因的细胞株。消除细胞污染：在某些情况下，体外细胞培养中的细胞可能会受到细菌、真菌等微生物的污染

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问求助求助

土井挞克树

固有淋巴细胞（ilcs)对疫苗效力影响有限，一般不会影响疫苗的设计策略

2 回答143 围观

问【请教】小鼠骨髓移植后再接种肿瘤，肿瘤生长显著减慢

土井挞克树

考虑肿瘤细胞接种量不足，可以提高接种量

2 回答379 围观

问人巨噬细胞标记

土井挞克树

流氏测人巨噬细胞是可以用CD11b CD68共标的

3 回答922 围观

问粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

sswei

可能就是RNA提取过程中出问题了，可以先用提取的RNA跑一下胶。

3 回答170 围观

问求助各位做口腔细胞实验的同仁，有无DOK细胞可分享

土井挞克树

这个之前我们实验室有可以分享。

1 回答293 围观

问关于BMDM培养的一些疑惑

sswei

可能是细胞培养老化后的细胞碎片为大。

3 回答7294 围观

问这是小鼠骨髓间充质干细胞吗

sswei

培养时间长了，从镜下来看，有部分老化了。

2 回答467 围观

问冻存的细胞复苏后，第二天需要换液吗？

Luckybabygirl

看看复苏12个小时后的状态，如果贴壁细胞很多可以补话，如果状态不是很好就换

4 回答926 围观

问请问细胞中间的黑色小斑块是什么

sswei

从镜下看可能是细胞老化的碎片或凋亡小体。

3 回答508 围观

问做CCK-8时需要换液吗？

认真搞科研的小王

最好进行换液，可以先将96孔板离心使细胞沉淀，再去除上清液

4 回答1552 围观

问怎样保存2-D凝胶？？

sswei

1 可以把蛋白质斑点先放在硅化的EP管中，放置于4°冰箱保存一个月左右，对蛋白质修饰和结果搜索都没什么大问题；2 可以将蛋白质经过酶解成肽段后再萃取出来，冻干后放置－20°或者－70°保存，直至MALDI-TOF-MS 可以分析蛋白质为止。如果时间长的话，最好放置－70°保存最好；3 看胶上的染色情况，假如是拷染的话，将胶放置时间达到半年也没关系，银染的话，最好染色后立刻取差异点。甚至可以做成干胶

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问CHO-S细胞在培养的过程中总是有很多结团沉淀，究竟是什么原因？？？

认真搞科研的小王

1.培养条件不当：CHO-S细胞在培养的温度、pH值、营养成分等方面都有着严格要求，如果这些因素不能得到良好控制，就有可能影响细胞的生长和代谢，进而导致细胞结块或沉淀。2.细胞密度太高：CHO-S细胞在高密度培养时容易形成结块或沉淀，特别是在无血清培养体系中更为明显。因此，在进行CHO-S细胞培养时，需要根据细胞的状态和具体情况来调整细胞密度，以避免细胞结块或沉淀。3.静置时间过长：如果在无搅拌或

3 回答1353 围观

问各位老师帮忙看下，CHO细胞培养过程中显微镜下看到很多黑色条状，这是污染了么

Luckybabygirl

也不一定，我每次传代前培养皿全新的啥东西都没有，刚传完拿到境下看也会有这种黑色的条状，但是后来发现他并不会影响细胞的生长，所以也就没管它了，就很奇怪，可能是每个人的操作手法不太一样，我师姐就没有，但是我就会有，我们俩养的是同一个细胞细胞生长状态一直很好，所以只要不影响细胞的生长，就应该问题不大。

3 回答1655 围观

问qpcr结果分析求问

dxy_t3td6v30

样品没问题，可能是引物扩增效率不行，或者循环数不对。

6 回答649 围观

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