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问
为什么rna酶活性稳定,很难被破坏,煮沸,高压灭菌都不能破坏它?
bamboopiggy
RNase,尤其是属于 RNase A 家族的那些,是相当小的、紧凑的蛋白质,含有几个半胱氨酸残基,可形成许多分子内二硫键]。 因此,变性的 RNase 在没有变性剂的情况下冷却至室温后往往会恢复其天然结构和部分功能。在冻融循环甚至高压灭菌后,RNases 可以保留大量活性。
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问
DNA的提取过程中不小心加入其他物质,那DNA的结果会有所不同吗?会有差错吗?
Topmicro
需要看你加入了什么物质,是否会降解DNA?是否会影响DNA的溶解度?在哪一步加入的?具体物质需要具体分析。
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问
做双酶切原本质粒大小3400多bp,两酶切位点之间的片段40多bp,为什么切下来跑胶只有2000多bp,不应是3000多bp么?
dxywode
提得好的质粒应该绝大部分是超螺旋的,跑得比marker的线性条带快。如果你5K的质粒真跑到5K的位置,才是没提好呢。想确定质粒的分子量最简单的办法是用单酶切成线性分子,再和marker比较。
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问
构建好的载体双酶切后,出现四条带,有哪位大佬知道什么原因吗?
天一湖医者
有没有注意到这四条带分别有多大,有两条带肯定是你的载体和目的片断,其余两条是什么就不清楚。也有可能是污染,或者是质粒提取出现问题,你的质粒有没有问题。
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问
请问大肠杆菌DH5Α和XL1BLUE质粒承载力有多少?
bamboopiggy
说明书上说的是10^8 cfu/ug的DNA,它是用puc19质粒测试的。
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问
细胞冻存液怎样配置,不同的配方有什么区别吗?
bamboopiggy
只要有血清,有5-10%的dmso,每个实验室的配方都不太一样。有的喜欢直接血清加dmso,有的是完全培养基血清dmso,有的认为完全培养基里有双抗。提议用单纯培养基加血清加dmso,看实验习惯,其实只要能复苏活了,哪种都行
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问
请问提取蛋白原液第一天测BCA后忘记放负80冰箱,4度冰箱过夜,担心蛋白降解,第二天重新测BCA,为什么有的样本蛋白浓度反而升高
whilt-shirt
BCA法本来就存在误差,你这个只能说是误差,并不能说是升高了
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问
在含DNA的滤液中加入嫩肉粉与将含DNA的滤液中放在60~75℃的恒温水浴箱中保温10~15min的原理有什么不同?
bamboopiggy
一个是化学性的,利用嫩肉粉中的木瓜蛋白酶,酶解去除蛋白质。一个是物理性的,利用DNA和蛋白质变性的温度差,将蛋白质变性,而不影响DNA。两者都是为了去除蛋白质。
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问
对提取出的人的全基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,胶孔总会很亮,仿佛有DNA的残留,未完全跑下来,为什么?
天一湖医者
主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物
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问
蛋白原液做完BCA放在4度过夜了,第二又测了一次BCA,结果如图,这批蛋白还能用么?
balalaLy
肯定是有降解的。BCA测浓度只是相对定量。跟BCA试剂的作用时间和作用温度很大关系。只能同一时间点测的样品间做比较,前后两次的只能看个大概。跑wb的话应该也是可以跑出来的,你就跑跑看呗。结果符合预期就当做一次重复实验呗。
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问
请问,提取的蛋白原液做完BCA放在4度冰箱过夜,忘记放在负20度了,还能用么,会不会谅解很多
迟C迟
问题不大,4度也不会降解这么快。长时间不用还是建议低温保存。
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问
求大神指点HOK细胞怎么培养
天一湖医者
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;3、用适量的冻存液重悬细胞,并放置于冻存管中;4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃。细
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问
请问我提了牙龈成纤维细胞原代,传代时候一直在培养基中加双抗,现实验需要去除双抗干扰,但是细胞一换成无双抗培养基就死怎么办?
bamboopiggy
是因为污染么?一停双抗细胞就污染了?你要去双抗的目的是什么呢?转染?其实现在好多转染试剂毒性没有那么大,不一定非要去除双抗。
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问
提取植物DNA时遇到多糖成分的干扰, DNA质量一直不高,如何消除多糖的影响?
迟C迟
可以买商业化的试剂盒,针对多糖含量高的植物样本的。
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问
能否用本试剂盒提取酵母中的基因组DNA?
bamboopiggy
您所谓的本试剂盒,是哪个试剂盒啊?一般能提取细胞和组织的genomic DNA的试剂盒,可以用来提取酵母的genomic DNA
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问
提取的DNA中有RNA污染,为什么?
bamboopiggy
你提取DNA的buffer里面,第一步重选细胞的液体里面有没有加RNase?需要加RNase的
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问
提取的基因组DNA生物活性差,为什么?
bamboopiggy
你用基因组dna来做,可能量比较低,最好把你需要测活性的那个片段克隆出来做。
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问
提取的基因组DNA有降解,为什么?
bamboopiggy
你是不是裂解细胞的时间长了,把genomic dna一起裂开了?建议优化一下裂解时间。
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问
质粒dna提取失败原因是什么
Keven轩
一般按照试剂盒来都没有问题,没提出来可能是质粒根本没转进去,或者操作问题
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问
DNA ladder能当marker使用吗
bamboopiggy
DNA ladder就是marker啊,不同的地方叫法不一样而已。
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