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        做双酶切原本质粒大小3400多bp,两酶切位点之间的片段40多bp,为什么切下来跑胶只有2000多bp,不应是3000多bp么?

        相关实验:含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验

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        loveliufudan

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        5 个回答

        user-title

        dxywode

        有帮助

        提得好的质粒应该绝大部分是超螺旋的,跑得比marker的线性条带快。如果你5K的质粒真跑到5K的位置,才是没提好呢。想确定质粒的分子量最简单的办法是用单酶切成线性分子,再和marker比较。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        可能你的酶切位点不是单一位点,也可能你的酶有星号活性,切乱了。你最好按照酶的说明书的时间和配比来做

        user-title

        未来9

        有帮助

        你可以进行测序看看切下来的片段序列,是不是存在中间酶切位点

        user-title

        Topmicro

        有帮助

        切割之前的质粒是环状结构,在切割之后变成线状结构,会导致跑胶的时候速度不统一。

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        天一湖医者

        有帮助

        首先确认你的marker是不是线性DNAmarker而不是质粒marker。然后看一下质粒的酶切位点是不是唯一的,即中间部分是不是也有你的酶切位点。

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