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问
WB同一样本,相同上样量,检测同一分子 但条带深浅相反的问题?
NatureBios
可能ecl曝光液在膜上不均匀(将印迹膜泡在曝光液中显影),也可能是点样的时候上样量误差(振荡混匀然后离心加样),
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问
同样的方法文件,同样的柱子,之前能出峰,现在不出峰,这是为什么? 柱子洗脱的时候有两个小峰
土井挞克树
可能与样本有关,检测一下样本是否有降解
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问
测蛋白磷酸化需要加pmsf吗
简简单单的8872
我做的时候加蛋白酶抑制剂,磷酸酶抑制剂后,就没再加PMSF了,看说明是不需要加的
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问
如何鉴别蛋白质溶液中是否含有某种特定的蛋白质
loveliufudan
有多种方法可以鉴别蛋白质溶液中是否含有某种特定的蛋白质。以下是其中的一些方法:SDS-PAGE:通过将蛋白质进行电泳分离,然后用特异性的抗体探测目标蛋白质。如果特异性的抗体与目标蛋白质结合,则可以在蛋白质条带上观察到信号。免疫沉淀:将蛋白质溶液加入到特异性抗体柱中,如果目标蛋白质与抗体结合,它将被沉淀下来,然后可以用Western blot或其他方法检测到目标蛋白质。ELISA:酶联免疫吸附检测法
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问
WB实验内参出现很多条带
sswei
可能存在以下原因:①细胞传代次数过多会使得蛋白表达不同②体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式,如乙酰化、甲基化、烷基化、磷酸化、糖基化等。③蛋白样本降解④可能检测到未经报道的新蛋白或同一蛋白家族中具有相似表位而结构不同的蛋白⑤蛋白样品可能没有充分变性,从而残留多聚体
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问
细胞裂解物中加入一抗,之后加入二抗,最后加珠子,那二抗可以促进一抗和蛋白的结合吗
dxyc42u
应该不可行,没没见其他人这样试过
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问
溴酚蓝形状很奇怪!!!求原因,影响结果吗
loveliufudan
一些可能导致溴酚蓝异常形状的原因包括:溴酚蓝溶液太老或者暴露在光线下过久,导致化学变化。溴酚蓝溶液受到污染,比如说有杂质、异物等。溴酚蓝溶液过浓或过稀,导致出现异常形状。这些异常形状可能会影响您的实验结果,因为溴酚蓝常常被用于测定DNA含量、蛋白质含量等实验中。因此,建议您在使用溴酚蓝之前,仔细检查其外观和清晰度,如果发现异常,最好不要使用,以免影响您的实验结果。
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问
包埋之前的板子有必要洗一下再开始加试剂吗?
土井挞克树
最好洗一下,因为洗一下可以把杂质和污染洗掉
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问
WB二抗选择(做的是化学发光)
sswei
小鼠一抗选择的是羊,那么二抗应该是小鼠抗羊
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问
求助:抽脂的脂肪组织提脂肪干细胞原代来不及提怎么保存?
土井挞克树
加入pbs中放到负80度保存。
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问
CXCR3的Western Blot抗体选择
bamboopiggy
可以试试abclonal,虽然是国产的,但是强在他们有试用装啊
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问
P65和pp65都下调了,说明什么。
bamboopiggy
可以认为是抑制了nfkb通路,但是建议再检测一下通路中的p50等,并且更换内参不能用total的p65 当内参了,可以考虑beta-actin或gapdh
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问
如何确定已有目的基因的CDS在DNA上是完整的,而不是拼接得来的,即如何确定该目的基因的CDS在DNA上没有内含子的插入。
sswei
内含子外显子都是相对的,在可变剪切情况下有些内含子就变成了外显子。大多数物种有基因组数据库如拟南芥的TAIR网站(www.arabidopsis.org),在数据库中搜索基因名,上面有相对准确的外显子内含子标注(可变剪切的存在导致外显子内含子并不是绝对的)
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问
麻烦帮我看看我的成脂诱导对不对
土井挞克树
看着像脂滴,可以做实验验证一下
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问
蛋白质与免疫亲和介质结合需多长时间?
土井挞克树
一般12小时之内,就会得到结果。
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问
wb胶板的配制求助大佬解答
balalaLy
分离胶用水压没有问题,我一直都是用水,那些痕迹可能是玻璃板上的脏东西或者是你配分离胶的时候有漏胶。另外,你的浓缩胶太长了,跑胶效果可能会没那么好。
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问
慢病毒感染细胞实验滴度问题
sswei
可能存在启动子表达较弱,残留有氨基酸等情况
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问
有可溶性表达无酶活
土井挞克树
可溶性表达一般检测的是结构,无酶活可能是活性区域被改变。
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问
WB内参条带异常分析
申东熙老伯
目的条带能跑出来吗?可能是蛋白样品制备过程出了问题。
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问
请问过曝了的western blot图片后期怎么补救
bamboopiggy
重新进行实验并调整曝光时间,以获得更好的图片。通过调整图像处理软件中的曝光和对比度参数,尝试使图片更清晰。使用图片编辑软件,例如Adobe Photoshop或GIMP,进行后期处理。其中一种方法是使用曲线工具来调整曝光和亮度。无论哪种方法,需要注意避免在修复过程中引入任何偏差或误差。
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