WB实验内参出现很多条带

可能存在以下原因:

①细胞传代次数过多会使得蛋白表达不同

②体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式，如乙酰化、甲基化、烷基化、磷酸化、糖基化等。

③蛋白样本降解

④可能检测到未经报道的新蛋白或同一蛋白家族中具有相似表位而结构不同的蛋白

⑤蛋白样品可能没有充分变性，从而残留多聚体

内参有杂带可能是一抗浓度高了，目的条带没有考虑是不是裁膜的时候切的位置不准确把条带裁掉了。

在 WB 实验中，出现多条内参带和目的蛋白全白的原因可能是以下几个方面：

蛋白质含量过多或过少：在上样时，如果含量过多或过少，可能会导致电泳不均匀，从而出现多个带或者某些带过弱或者过强。

溶液制备或者保存不当：如蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂的添加量不够，容器的清洁度不够，保存温度不合适等。

不适当的孵育时间和浓度：孵育时间和浓度不合适可能会导致二抗与一抗不匹配，从而出现多条内参带和目的蛋白全白的情况。

其他技术因素：如电泳电压、转膜条件、封闭时间等可能会影响 WB 实验的结果。

针对这种情况，可以尝试以下几种方法来解决问题：

尝试不同的孵育时间和浓度，以找到最适合实验的条件。

检查蛋白质的含量是否过多或过少，如有必要可以适当调整上样量。

检查溶液制备和保存是否正确，确保所有试剂都是最新鲜的。

检查实验的其他技术参数，如电泳条件、转膜条件、封闭时间等是否合适。

如果以上方法仍然不能解决问题，可以考虑尝试更换不同批次或品牌的一抗和二抗，或者尝试使用不同的内参蛋白。

内参浓度过高了，我用actin不管是进口的还是国产的，一般都是1:5000-10000稀释，然后也有可能是抗体使用次数过多也会出现多条杂带