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问
瞬时互作蛋白怎么交联
土井挞克树
可以选择紫外线交联,或者化学交联法。蛋白质通过交联方法可以稳定或永久连接相互作用复合物中的成分,有助于鉴别这些瞬时接触。
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问
请问紫外交联和化学交联哪一种更好一点
loveliufudan
如果要保留蛋白质的原始结构和功能,可以优先考虑紫外交联;如果需要稳定固定样品中的相互作用,并且样品的结构和功能不受交联剂的影响,可以选择化学交联。
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问
交联剂的使用,是结合更容易和牢靠吗,感觉平时实验好像没用到
赛默飞世尔科技
交联剂主要是在相互作用较弱的蛋白互作检测中会用到,因为蛋白间相互作用较弱,很容易在样本制备过程中就破坏掉,所以这种情况下会推荐使用交联剂先固定住蛋白间的相互作用,以保证在后续CO-IP实验中被检测到。对于蛋白间相互作用比较强/稳定,在温和裂解液中不会破坏掉蛋白间的相互作用,这种情况就不需要用到交联剂。
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问
我想请问coip蛋白破碎离心后,浮在上层的白色物质会不会影响蛋白与珠子结合,有什么办法可以避免吸到白色物质吗?
土井挞克树
可以用吸管缓慢多次吸取掉白色物质,或者加pbs稀释,更容易清除一些
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问
免疫共沉淀-样品制备 哪些步骤是可以灵活调整的,比如哪一步可以暂停一下?
土井挞克树
一般建议尽快裂解,负八十度保存不要超过三个月,时间太长会造成蛋白降解
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问
裂解液成分中Triton x 100,NP-40,SDS,deoxycholate这几个哪些是CoIP比较适用的?为什么? 细
土井挞克树
我一般会选择Triton x 100,因为coip通常不需要那么强的裂解作用,其他几种容易裂解过度
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问
有适用于植物的IP裂解液产品吗
土井挞克树
可以选择植物RIPA裂解液,裂解效果比较强
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问
交联试剂盒里的细胞裂解液需要额外再加蛋白酶抑制剂么?
土井挞克树
一般是不需要的,裂解液中包含蛋白酶抑制剂,如果实验过程中蛋白降解太多,建议另外添加
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问
关于膜蛋白的Co-IP,有没有比较高效提取膜蛋白但是不破坏蛋白相互作用的裂解液呀
土井挞克树
这个可以考虑某些品牌新出的试剂盒,据说效果都不错,或者使用离心管柱法进行提取,能最大程度的保护蛋白性质不被破坏
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问
裂解液如何选择? 如何做泛素化的IP,条带怎么看
sswei
用于普通的Western、IP或co-IP,推荐使用Western及IP细胞裂解液,另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中
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问
细胞裂解液用乙酰化抗体富集IP后,胶内酶解MS检测会不会丢失一些痕量修饰的蛋白
土井挞克树
又可能会少量丢失或降解,痕量修饰蛋白在酶解时可能有少量丢失
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问
老师用动物组织标本做COIP与细胞做COIP有什么区别?您更推荐哪个?
土井挞克树
胞内蛋白做coip一般选用细胞标本,胞外蛋白一般选择组织标本/
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问
蛋白电泳时设置了恒压但是变成恒流电压在不断下降其他人使用电泳仪是能设置恒压,我们不同的是电泳槽,而且电极缓冲液用了一次就发黄为啥。
loveliufudan
如果在进行蛋白电泳时设置了恒压,但实际上电压在不断下降,有可能是由于电泳槽和电极之间存在电阻或连接不良等问题导致的。此时,电流可能会持续增加,直至超过预设的电流限制,从而导致恒压模式自动转变为恒流模式。如果其他人使用电泳仪可以设置恒压,而您的电泳槽却不行,可能是由于电泳槽的设计、材质等方面存在问题。不同的电泳仪和电泳槽可能有不同的电流密度、电极距离等参数,需要根据实际情况和要求进行调整和优化。至于
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问
基于单链DNA构建的PROTAC靶向降解膜蛋白中,稀释单链DNA的培养基的血清浓度一般不要高于百分之多少
loveliufudan
一般来说,建议将血清浓度控制在1%以下。如果实验条件允许,可以将血清浓度降至0.1%或更低。需要注意的是,血清的成分非常复杂,包括多种蛋白质、脂质、激素、生长因子等,这些成分可能会与实验所需的蛋白质或DNA结合,从而影响实验结果。因此,在进行基于单链DNA构建的PROTAC实验时,应该根据实验需要和要求进行血清浓度的优化和控制,以获得最佳的实验结果。
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问
HPLC和指纹图谱有什么具体的区别吗,它们检测样品的条件可以通用吗
loveliufudan
HPLC(高效液相色谱)和指纹图谱是两种不同的化学分析方法,其检测原理、应用范围和检测条件都有所不同。HPLC是一种常用的分离和纯化技术,它基于化学物质在流动相和固定相之间的差异进行分离,通常用于分离和检测化学物质的纯度、含量、结构和化学性质等。HPLC的检测条件需要根据样品的性质和要求进行优化和调整,如流动相的组成、流速、温度、压力等参数。指纹图谱是一种基于多成分分析的质量控制方法,它通过分析样
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问
WB只能跑出来内参没有目的条带 求助
z流沙z
这种情况一般可能考虑抗体种属的问题,确认一下一抗二抗的种属正确
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问
双荧光素酶插入启动子之后荧光比空载低
dxy_s1v2ced7
“双荧光素酶实验荧光值异常,常见原因给你列几个方向: 1.启动子/载体因素:截短后的启动子活性弱,或者载体构建有干扰(比如启动子和空载序列重叠 ),都可能让荧光变低;也得检查质粒质量、转染条件是否一致~ 2.实验操作细节:荧光素没避光保存、裂解液处理不彻底,会影响信号;另外,荧光信号的采集检测也超关键!要是仪器的光电探测‘不给力’,微弱荧光抓不住,结果也会偏差~像滨松 PMT 这类高灵敏度组件,能
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问
coip结果分析-救救孩子吧!!!
是TTT
这种结果没有意义60的位置可能是重链,110没有条带你需要排除以下原因:一.跑input排除蛋白没有降解。二.确认A抗体说明书可以用来做co-ip。三.co-ip全程需要冰上或者4℃。四.co-ip完成以后,蛋白洗脱步骤是否无误。五.co-ip实验除了需要有实验组,还应该设置对照组,对照组应为同种属的iGg抗体去拉
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问
WB求助
balalaLy
200mA 1.5小时,如果是70以下的蛋白应该没问题的。如果你的蛋白分子量大,可能就是没有转过去。另外抗体的浓度和抗体稀释液需要调一下。
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问
WB胶原指标跑不出来
sswei
样品浓度太低,建议将样品缓冲液冻干一部分,或者以超滤等方法,提高目的蛋白的浓度后,在进行电泳。
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