裂解液成分中Triton x 100，NP-40，SDS，deoxycholate这几个哪些是CoIP比较适用的？为什么？ 细

我一般会选择Triton x 100，因为coip通常不需要那么强的裂解作用，其他几种容易裂解过度

Triton X-100和NP-40是常用的非离子型和离子型清洗剂，常用于细胞裂解，具有较好的细胞膜溶解和蛋白质溶解的能力，适用于Co-IP实验。SDS和deoxycholate也是常用的清洗剂，但它们一般用于SDS-PAGE电泳前的蛋白质裂解液中，不适用于Co-IP实验，因为它们可以使蛋白质变性，从而破坏了蛋白质与抗体的结合能力。总体来说，对于Co-IP实验，应选择适当的清洗剂，以确保裂解液的清洁度和目标蛋白与抗体的充分结合。

1、不同裂解成分的裂解强度不同，理想的裂解液可以保留蛋白质的天然构象，将抗体结合位点变性减到最少，同时从样本中释放足够量的蛋白，以满足实验需求，对于Co-IP实验，建议优先尝试更温和的NP-40或TritonX-100裂解液。

2、一般情况下，每次IP 反应的总蛋白量建议在500-1,000g 之间，可参考使用产品说明书确定细胞和蛋白用量。

3、如果IP通道没有信号可能是蛋白之间没有发生互作，但也可能存在以下原因：目的蛋白在样品中不表达活表达较弱；蛋白提取不充分或者降解；抗体选择或者用量不当；抗体和beads结合不好；目的蛋白没有被洗脱下来等。

5、以Pierce 蛋白A/G 琼脂糖为例，2-20μg抗体建议加入10μL树脂，25-50μg抗体建议加入20μL树脂，50-250μg抗体建议加入50μL树脂，具体使用量请参考产品说明书。