土井挞克树
这个可以考虑某些品牌新出的试剂盒,据说效果都不错,或者使用离心管柱法进行提取,能最大程度的保护蛋白性质不被破坏
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对于膜蛋白的Co-IP实验,需要使用含有非离子型洗涤剂的裂解液来提取膜蛋白,以保持膜蛋白在裂解液中的完整性和可溶性。具体选择哪种裂解液取决于您所研究的膜蛋白的特性以及所需分离的交互作用伙伴。一些常用的含有非离子型洗涤剂的裂解液包括:
RIPA缓冲液:含有1% NP-40、0.5% DOC、0.1% SDS、150 mM NaCl、50 mM Tris-HCl(pH 8.0)以及蛋白酶抑制剂等成分,适用于大多数膜蛋白。
Triton X-100缓冲液:含有1% Triton X-100、150 mM NaCl、50 mM Tris-HCl(pH 7.5)以及蛋白酶抑制剂等成分,适用于一些易于裂解的膜蛋白。
CHAPS缓冲液:含有2% CHAPS、7 M尿素、2 M硫酸铵、20 mM Tris-HCl(pH 8.0)以及蛋白酶抑制剂等成分,适用于一些难以裂解的膜蛋白。
此外,为了保护膜蛋白的完整性和可溶性,裂解液中一般还需要加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂等成分。但是需要注意的是,裂解液的成分可能会对Co-IP实验的结果产生一定影响,因此需要针对具体实验进行优化和调整。
赛默飞世尔科技
赛默飞世尔的Mem-PER™ Plus 膜蛋白提取试剂盒(货号: 89842)可利用选择性提取方案从培养的哺乳动物细胞或组织中富集整合膜蛋白和膜联蛋白,所用试剂以温和的去污剂为主。组分可直接兼容许多下游应用,可在约 1 小时内快速高效分离出膜蛋白。
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