裂解液如何选择？ 如何做泛素化的IP，条带怎么看

用于普通的Western、IP或co-IP，推荐使用Western及IP细胞裂解液，另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。

对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强或中)或SDS裂解液。对于植物样品，优先推荐使用植物Western及IP细胞裂解液和植物RIPA裂解液(强) 。

一般裂解液包含以下几个组分:缓冲系统；盐离子浓度；变性剂；蛋白酶、去修饰酶抑制剂；还原剂。

裂解液的选择主要受细胞组织蛋白种类有关，有强中弱之分。

做泛素化ip的时候，条带的位置主要反映蛋白的大小，降解情况，这些条带上都有反应

选择裂解液时，需要根据目标蛋白的生理特性、亲和力和实验需求等因素进行考虑。常用的裂解液包括含有 Triton X-100、NP-40、SDS、deoxycholate 等表面活性剂的 RIPA 缓冲液、含有 Triton X-100、NaCl、Tris-HCl、EDTA 等的 NP-40 缓冲液、含有 Triton X-100、Tris-HCl、NaCl、deoxycholate 等的 TNE 缓冲液等。

在进行泛素化的 IP 实验时，可以使用特异性抗体对泛素进行免疫共沉淀，也可以使用一种含有泛素结构域的蛋白作为诱饵蛋白，并用特异性抗体进行免疫共沉淀。进行免疫印迹时，可以用特异性抗体检测目标蛋白是否泛素化。

条带的检测需要根据实验的具体情况和所用的抗体进行优化，一般可根据分子量标准品来判断目标蛋白的分子量位置。如果目标蛋白被泛素化，免疫印迹时会出现高分子量的条带。

建议根据样品类型和靶抗原在细胞内的位置（即细胞核、胞质溶胶、膜等），选择适当的裂解策略，以最大限度地提高结构的完整性。