实验问答22,004,418 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问LC3B

周末也要努力呀

可以在原有基础上增加上样量或者更换抗体继续跑这个条带。

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问求助，为什么wb两边marker会有印记，洗了半个小时洗不下去

土井挞克树

这个是转印时间太长了导致的，减少转印时间就好了

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问求助166kd的NMDAR2b的转膜条件，好难做出来呀，你们转膜液配制有没有特别的改动

于小鱼鱼1998

Western转膜液没有什么特殊的，掌握好甲醇低浓度就可以，太高浓度会容易失败，sds可以不加

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问蛋白表达

于小鱼鱼1998

你可以通过ncbi网站或者pubmed网站进行查询

3 回答428 围观

问ZDOCK搞好的蛋白对接用pymol打开后怎么显示有问题？请问一下各位大佬，该怎么解决呢？

dxy_y6nyvy78

因为两个链都是A，需要把另一条链改成Bpymol中选择乱码的那条链然后输入命令alter sele, chain=‘B’

5 回答3391 围观

问请问中药冻干粉给细胞浓度具体怎么给？

此用户已注销

正常是按照有效成分算，你这个应该就是提取的冻干粉的量来算。

5 回答3043 围观

问菌液酶标仪od600怎么测，需要添加显色什么的吗？

此用户已注销

光的吸收度A=abc，其中a为吸光系数，单位L/(g·cm)，b为光在样本中经过的距离（通常为比色皿的厚度），单位cm ， c为溶液浓度，单位g/L。实对于OD600吸收度影响最大的是光在样本中经过的距离，比色皿光是横向通过，酶标仪光是纵向通过，比色皿的厚度为1cm，那么只要在酶标板中加入菌液使其深度也达到1cm（一般300uL左右），然后检测OD600的值，扣除LB本底的吸收度，就可以大致估算出

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问Elisa实验皮肤样品匀浆处理。

dxy_3rh9wh0e

50mg组织加1mlpbs和10ul蛋白酶抑制剂

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问请问这个诱导成功了？RAW264.7诱导破骨细胞，RANKL（100ng/ml）

skyye

诱导时间是多久呢？一般诱导成骨的话，镜下可见较多个多核巨细胞（破骨细胞）的

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问原核表达未诱导的比诱导的的目的蛋白都多

银焰之光

是不是样品跑反了啊，拿错了？怎么可能未诱导的样品中目标蛋白这么明显的表达了？建议重新电泳。如果是不经过诱导就能表达出来这么高量的目标蛋白，简直神了。目标蛋白经鉴定正确，为啥会影响纯化呢。

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问WB结果目的蛋白大小偏大是什么原因？

dxy_sbw2taor

感觉是凝胶的问题可以上个mk看看分子量1 回顾凝胶配制过程2是否蛋白发生聚合

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问[求助] 目的基因克隆进入pet28a载体是否在上游引物上要加ATG

dxy_xextz7w2

不需要，目的基因插入也是考载体本身启动翻译，跟目的基因本事无关，但是设计引物序列时要考虑插入的目的基因不能有移码突变

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问做蛋白组学的标本有什么要求

此用户已注销

1、对于蛋白质溶液样本需提供溶剂的试剂成分；2、若样品中含有毒性或腐蚀性的物质，必须事先声明；3、一些病原性的微生物或具有侵染性的病变组织需进行灭活；4、用银染法进行蛋白胶染色时，应选择与质谱分析兼容的试剂，银染的样本不能进行脱色。综上可知，制备蛋白质质谱样品没有一个固定或统一的方法，应根据具体的实验目的和质谱分析的要求进行样本制备，在样本制备过程中应遵循准确记录、迅速低温的原则，最大限度的缩短样

5 回答1104 围观

问蛋白镍柱纯化后透析怎么选择透析液

此用户已注销

透析液的选择应该根据蛋白质的性质和实验要求而定，一般来说，可以选择与蛋白质缓冲液成分相同或相似的透析液。透析时间一般在2-4小时之间。更换透析液的时间也应该根据实验要求而定，一般建议在6-8小时和10-14小时（第二天早晨）更换透析液。

5 回答5141 围观

问LC3总是跑不出来，那个大佬能指点一下，任何步骤都是按要求来的，但就是没目的条带

sswei

多查查样本的表达情况和自噬情况。

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问SPR分子互作技术的技术原理是什么？

静心观照

表面等离子共振（ SPR ）是借助传统光学现象，利用光在不同介质中产生消逝波后与等离子波产生共振，进而可以构建生物分子相互作用的生物传感分析技术，实时跟踪在天然状态下生物分子间的相互作用，用以检测生物传感芯片上配位体与分析物之间的相互作用情况。

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问请问蛋白质组学研究主要有哪些技术手段？主要的优缺点有哪些？

高山云初

主要分为四大类：第一类是凝胶和非凝胶的蛋白质组分离技术；第二类是基于生物质谱技术的蛋白质组学鉴定技术；第三类是蛋白质组学定量技术；第四类是基于生物信息学的蛋白质组学数据的分析处理技术。优缺点1. 蛋白质组学分离技术目前蛋白质组学常用的分离技术主要有两种类型：一是凝胶技术，主要包括双向凝胶电泳（Two-dimensional electrophoresis，2-DE）技术以及后来出现的双向荧光差异凝

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问通过蛋白组学研究找到两组蛋白的差异蛋白

高山云初

蛋白组学是通过对生物体内蛋白质的研究来揭示其生物学功能及其与疾病之间的关系。在蛋白组学研究中，筛选差异蛋白是非常重要的一步。差异蛋白指的是在两组或多组样品中，表达量或修饰状态存在显著差异的蛋白质。通过筛选差异蛋白，我们可以了解不同生理状态或疾病状态下蛋白质表达的变化情况，从而为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的信息。蛋白组学筛选差异蛋白的方法主要包括两维凝胶电泳、质谱分析、蛋白芯片等。

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问ELISA实验原理及注意事项。

静心观照

ELISA是将抗原或抗体结合在固相载体表面，利用抗原抗体的特异性结合以及抗体或者抗原上标记的酶催化特定底物发生显色反应，实现目标物检测的免疫分析方法。类型直接法：将抗原按一定的比例稀释好包被到固相载体上，然后加入稀释好的特异性的酶标抗体，孵育后加入底物显色并判读结果。间接法：将已知抗原连接在固相载体上，待测抗体与抗原结合后再与酶标二抗结合，形成抗原一待测抗体-酶标二抗的复合物，复合物的形成量与待测

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问想问问大家出现这种条带的原因有哪些，想让它看起来均匀，而不是一边量多一边量少的情况。怎么改进？

静心观照

1、可能是SDS-PAGE胶中存在气泡或者某不溶性颗粒解决办法：配胶过程中要小心，使用无杂质的液体。配胶用的海绵垫，如果用了很久之后，会从下面往上面漏小气泡，当气泡足够小并且胶快凝固的时候，走到中间的小气泡就停留在胶内，并会影响到后面的跑胶。另外配胶用的水，SDS，Tris缓冲液要注意不要有杂质，需过滤后使用。2、置胶有问题解决办法：把胶配好，不合格的胶坚决不用。可能是胶没有配置好，胶凝固后不均一

3 回答524 围观

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