• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        Elisa实验皮肤样品匀浆处理。

        相关实验:ELISA 实验

        user-title

        GorgeousGao

        解冻皮肤组织后,称取50mg,加入提取液研磨后取上清,请问50mg组织加入多少提取液?提取液中PBS与蛋白酶抑制剂的量是多少呢?多谢

        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        dxy_3rh9wh0e

        有帮助

        50mg组织加1mlpbs和10ul蛋白酶抑制剂

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        50mg组织加1ml处理液就可以

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        1、刚取得的新鲜组织样本用PBS 洗净。

        2、准确称取 50mg 组织,加入 1ml 匀浆缓冲液A,用玻璃匀浆器充分匀浆。

        3、在 100×g,4℃离心 3 分钟,弃沉淀,取上清。样本检测:

        1、在 96 孔板中加入 200μL 匀浆上清液、2μL DHE 探针,用移液器吹打,使之充分混匀。

        2、在 37℃避光孵育 30 分钟。

        3、置于荧光酶标仪中,后于激发波长为 488-535nm、发射波长 610nm 检测荧光强度。蛋白定量:

        1、另取 50μL 上清匀浆液,用 PBS 大约稀释 30 倍。

        2、取 100μL 进行蛋白定量。结果处理:

        以荧光强度/毫克蛋白表示组织活性氧强度。

        user-title

        粥辰辰辰辰

        有帮助

        应用 TRIPURE 提取蛋白质步骤:含蛋白质上清液中加入异丙醇:(1.5ml 每 1mlTRIPURE 用量)


        倒转混匀,置室温 10min


        离心:12000 g,10min,4 度,弃上清


        加入 0.3M 盐酸胍/95%乙醇:(2ml 每 1mlTRIPURE 用量)


        振荡,置室温 20min


        离心: 7500g,5 min,4 度,弃上清


        重复 0.3M 盐酸胍/95%乙醇步 2 次


        沉淀中加入 100%乙醇 2ml


        充分振荡混匀,置室温 20 min


        离心: 7500g,5min,4 度,弃上清吹干沉淀


        1%SDS 溶解沉淀


        离心:10000g,10min,4 度


        取上清-20 度保存(或可直接用于 WESTERN BLOT)


        存在的问题:加入 1%SDS 后沉淀不溶解,还是很大的一块,4 度离心后又多了


        白色沉定,SDS 结晶?测浓度,含量才 1mg/ml 左右。


        解决:提蛋白试剂盒,另外组织大小适中,要碎,立即加 2X BUFFER,然后煮5-10 分钟,效果很好的。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序