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        原核表达未诱导的比诱导的的目的蛋白都多

        相关实验:蛋白纯化实验

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        载体pet28a IPTG诱导 0.2-0.6mM,菌体长到0.78OD时开始诱导,诱导温度37℃,诱导时间6小时,发现加了IPTG的诱导组菌体长得少,所以统一诱导组和未诱导组OD值,取菌液进行离心加上样缓冲液煮沸之后跑电泳。结果发现未诱导的比诱导的蛋白表达都高。蛋白条带预测40kDa,位置也对。所以对后续蛋白过柱纯化有影响么

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        3 个回答

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        银焰之光

        有帮助

        是不是样品跑反了啊,拿错了?怎么可能未诱导的样品中目标蛋白这么明显的表达了?建议重新电泳。如果是不经过诱导就能表达出来这么高量的目标蛋白,简直神了。目标蛋白经鉴定正确,为啥会影响纯化呢。

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        loveliufudan

        有帮助

        可能有以下几点原因:


        1. 载体或者插入片段存在问题,导致基因在无IPTG条件下也能发生一定的漏表达。


        2. IPTG的浓度或诱导时间设置不当,导致蛋白表达量低。可以优化这两个参数。


        3. 诱导组生长状况较差,虽然表达目的蛋白但总蛋白量相对较低。


        4. 目标蛋白对IPTG存在一定的毒性,抑制了菌体正常生长。


        5. 目标蛋白在IPTG诱导条件下加速降解,最终表达量受到影响。


        6. 样本制备过程中损失了部分蛋白。


        对后续的蛋白纯化主要影响在于目标蛋白的相对比例不同,IPTG诱导组目标蛋白相对比例可能比较低,这会降低纯化效率。

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        此用户已注销

        有帮助

        没有影响,载体pet28a IPTG 诱导0.2-0.6mM,菌体长到0.78OD时开始诱导,诱导温度37℃,诱导时间6小时,发现加了 IPTG 的诱导组菌体长得少,所以统一诱导组和未诱导组 OD 值,取菌液进行离心加上样缓冲液煮沸之后跑电泳。结果发现未诱导的比诱导的蛋白表达都高。蛋白条带预测40kDa,位置也对。

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