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        想问问大家出现这种条带的原因有哪些,想让它看起来均匀,而不是一边量多一边量少的情况。怎么改进?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        dxy_023c0vrr

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        3 个回答

        user-title

        静心观照

        有帮助

        1、可能是SDS-PAGE胶中存在气泡或者某不溶性颗粒

        解决办法:配胶过程中要小心,使用无杂质的液体。配胶用的海绵垫,如果用了很久之后,会从下面往上面漏小气泡,当气泡足够小并且胶快凝固的时候,走到中间的小气泡就停留在胶内,并会影响到后面的跑胶。另外配胶用的水,SDS,Tris缓冲液要注意不要有杂质,需过滤后使用。

        2、置胶有问题

        解决办法:把胶配好,不合格的胶坚决不用。可能是胶没有配置好,胶凝固后不均一。另外还有一种可能是样品中含有太多杂质,没有离心下来,然后杂质沉积在孔的中间,蛋白自然被推挤到两边。

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        高山云初

        有帮助

        第一点灌胶要匀,第二转膜要注意排气泡,及保持低温防止胶变形。

        user-title

        小小翻车鱼

        有帮助

        条带不均匀在实验中出现可能是由于多种原因导致的。以下是一些建议,可以帮助改进实验并实现均匀的条带:


        1. 确保操作规范:在整个实验过程中,确保遵循正确的操作流程,避免交叉污染,同时确保正确的温度和时间。


        2. 确保样品均匀:确保加入微孔板中的样品是充分混合的,且浓度一致。可以使用涡旋混合器或移液器反复吹打,以实现样品的均匀混合。


        3. 使用新鲜试剂:确保使用的抗体、抗原、酶标记物和底物都是新鲜的。这些试剂可能会随时间而失活,从而导致实验结果出现偏差。


        4. 优化浓度:优化实验中各个组分的浓度,包括一抗、二抗、抗原和底物。过高或过低的浓度都可能导致条带不均匀。


        5. 调整实验条件:如果条带不均匀是由酶催化反应所致,可以尝试调整实验条件,如温度、反应时间和pH值等,以优化反应条件。


        6. 清洁微孔板:确保微孔板在使用前彻底清洁,并避免在实验过程中引入杂质。可以使用清洁剂或酒精擦拭微孔板,以去除残留物。


        7. 确保微孔板质量:确保微孔板的质量良好,以确保实验结果的准确性。可以使用新的微孔板进行实验,以排除微孔板问题导致的条带不均匀。


        8. 检查仪器:确保酶标仪等实验仪器工作正常,校准仪器以消除设备误差。


        9. 优化洗涤步骤:确保洗涤充分且规范,以避免非特异性结合导致条带不均匀。


        10. 结果分析:在分析实验结果时,注意背景值的影响,并进行适当的校正。如果条带依然不均匀,可以尝试重新实验,排查问题所在。


        通过上述方法进行改进,可以提高实验结果的准确性,实现均匀的条带。如果问题仍然存在,可以进一步分析实验条件和操作,以找出可能的原因。

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