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        [求助] 目的基因克隆进入pet28a载体是否在上游引物上要加ATG

        相关实验:🔥 蛋白质的原核表达

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        dxy_tphcsz00

        找到的一个基因它的CDS开头不是ATG,是GTG,我想把这段基因CDS通过双酶切(NdeI Hindiii)连到pet28a载体上,NdeI酶切位点也有ATG ,后面酶切的时候被切走了吧,但是我又看到PET28a表达载体有起始密码子ATG和核糖体结合位点,把插入序列就能进行表达,请问我在设计上游引物时还需要在酶切位点后面加ATG嘛?
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        5 个回答

        user-title

        dxy_xextz7w2

        有帮助

        不需要,目的基因插入也是考载体本身启动翻译,跟目的基因本事无关,但是设计引物序列时要考虑插入的目的基因不能有移码突变

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        土井挞克树

        有帮助

        需要的,在上游引物应当加ATG

        user-title

        粥辰辰辰辰

        有帮助

        这个的话其实是不需要在上游引物上加ATG的

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        此用户已注销

        有帮助

        看你的蛋白质性质,连接到载体上前面最好不要带多余的氨基酸,因为有的蛋白翻译后需要经过修饰才有活性的,如切去ATG编码的第一个甲硫氨酸(MIF家族),若前面带了很多氨基酸,则很难修饰,很可能没有活性。

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        还是需要在上游引物是加ATG哟

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