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ros荧光探针
汤姆卜丽波
根据你的荧光,重新设置一下激发光长度
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问
WB蛋白孵育
汤姆卜丽波
试着缩短一点一抗的孵育时间,多洗几遍看会不会好一点
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问
溶解曲线异常
Eason老歌迷
可能有几个原因。主峰前面出峰的话,是引物二聚体,而如果主峰后面出峰的话,一般的是非特异性的大片段的扩增。改变引物浓度,退火温度和镁离子浓度试一试。
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问
想问一下以下条带不出还有孔间间隔黑乎乎的是什么原因啊,不止出现过一次了,怎么调整好?
Eason老歌迷
你这是不是孵二抗时间太长了啊!一个小时就够,你这感觉是孵太长时间二抗了,我之前也遇到过这情况。
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问
目的条带很细(前几次都是正常粗细的条带),怀疑是一抗失效(国产的一抗用了5次左右),重新配了一抗重新孵,还是很细,请问原因是什么
Eason老歌迷
你前几次和这一次上样的量差别大吗?然后你电泳的时间长短呢?你制作的胶浓度和之前有变化吗
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问
IP后实验组有和IgG相同的条带,但阴性对照没有
月下扣动板机
看不到B蛋白的Western条带 或者 条带较弱。 (因为IgG并不能特异性的与任何蛋白结合,那么IgG所带下来的蛋白都是非特异性的与IgG结合的蛋白,得到的东西就是背景。)
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wb 条带解读、深浅?粗细?齐不齐?
balalaLy
条带的灰度值,包括了深浅、粗细,首先要看内参齐不齐,齐的前提下再来对比各个组的目的蛋白
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问
救救,WB苦手又来了,几乎所有条带都这样,没有蛋白,背景脏~
天一湖医者
背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。
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求教电泳条带亚基含量分析软件
bamboopiggy
不在marker上没事啊,只要组间比较有差异就可以,image J好用的,实在不行,可以用ps读灰度值
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请教跨膜蛋白的原核表达、分离、纯化
汤姆卜丽波
也不是做不出来,我看到很多做跨膜蛋白功能的都会做体外纯化,可以再仔细和公司沟通一下
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求助!求助!
汤姆卜丽波
哪个?指示剂下面的那条么,都有的没关系
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kcl切胶回收蛋白
balalaLy
很有可能是你的buffer出现问题
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问
流式和wb结果有差异
汤姆卜丽波
首先流式和wb抗体不一样,不能混用,还有就是你要明确你的蛋白表达量怎么样,流式不适合检测低表达的蛋白,低表达的还是采用western(尤其是化学发光底物更佳)和免疫组化更好。当然,流式最大的一个特点就是,可以定量(百分比),如果是高表达的用流式细胞仪非常有优势。
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问
WB跑胶时同时显示V和mA
汤姆卜丽波
一般是看左边的指示灯,你这个是74mA跑过来的
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问
染料法绝对定量,为什么扩增曲线和熔解曲线都有,但是测不出Cq值
汤姆卜丽波
这个扩增曲线就有问题,8-9个循环就到平台期了,曲线也不光滑,看看是不是模板浓度的问题,还有你的酶用对没
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3T3-L1诱导时细胞的空隙很大,越诱导越大是什么情况呀
汤姆卜丽波
是不是加诱导剂的问题,细胞状态是对的,3T3L1加诱导剂后比较脆弱,一定要轻轻加,用移液器
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wb条带出不全,35kD以下蛋白都是空白,求指导
渐雨渐雨
有试过把胶倒过来转膜,但是仍然大分子的能转过去,小分子的消失。转膜用的是0.45的PVDF膜。分离胶和浓缩胶的比例也测试过,试过1:1和3:7的,但仍然是这个样子。分离胶有试过10%、12%、15%的,小分子仍然出不来。
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WB一抗和内参的区别
balalaLy
要先理解什么叫内参。GAPDH跟你的目的基因一样,都是细胞中表达的某种蛋白,只不过GAPDH在诸多细胞中都有表达且表达量不容易受其它因素的影响,所以被用来作为参照,就是内参的意思
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co-ip的两个问题
汤姆卜丽波
位置不同可能是收到了重链的干扰。避免干扰可以使用IPkine二抗,增加Input和IP泳道上样量,减少曝光时间,以及阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。
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请问脂血样本对ELISA实验结果有什么影响呢
汤姆卜丽波
不同程度的脂血标本对 ELISA 法检测结果的影响具有很大影响,会出现吸光度高的假阳性,容易出现误诊
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