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救救,WB苦手又来了,几乎所有条带都这样,没有蛋白,背景脏~
天一湖医者
背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。
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问
求教电泳条带亚基含量分析软件
bamboopiggy
不在marker上没事啊,只要组间比较有差异就可以,image J好用的,实在不行,可以用ps读灰度值
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问
请教跨膜蛋白的原核表达、分离、纯化
汤姆卜丽波
也不是做不出来,我看到很多做跨膜蛋白功能的都会做体外纯化,可以再仔细和公司沟通一下
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问
求助!求助!
汤姆卜丽波
哪个?指示剂下面的那条么,都有的没关系
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问
kcl切胶回收蛋白
balalaLy
很有可能是你的buffer出现问题
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问
流式和wb结果有差异
汤姆卜丽波
首先流式和wb抗体不一样,不能混用,还有就是你要明确你的蛋白表达量怎么样,流式不适合检测低表达的蛋白,低表达的还是采用western(尤其是化学发光底物更佳)和免疫组化更好。当然,流式最大的一个特点就是,可以定量(百分比),如果是高表达的用流式细胞仪非常有优势。
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问
WB跑胶时同时显示V和mA
汤姆卜丽波
一般是看左边的指示灯,你这个是74mA跑过来的
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问
染料法绝对定量,为什么扩增曲线和熔解曲线都有,但是测不出Cq值
汤姆卜丽波
这个扩增曲线就有问题,8-9个循环就到平台期了,曲线也不光滑,看看是不是模板浓度的问题,还有你的酶用对没
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问
3T3-L1诱导时细胞的空隙很大,越诱导越大是什么情况呀
汤姆卜丽波
是不是加诱导剂的问题,细胞状态是对的,3T3L1加诱导剂后比较脆弱,一定要轻轻加,用移液器
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问
wb条带出不全,35kD以下蛋白都是空白,求指导
渐雨渐雨
有试过把胶倒过来转膜,但是仍然大分子的能转过去,小分子的消失。转膜用的是0.45的PVDF膜。分离胶和浓缩胶的比例也测试过,试过1:1和3:7的,但仍然是这个样子。分离胶有试过10%、12%、15%的,小分子仍然出不来。
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问
WB一抗和内参的区别
balalaLy
要先理解什么叫内参。GAPDH跟你的目的基因一样,都是细胞中表达的某种蛋白,只不过GAPDH在诸多细胞中都有表达且表达量不容易受其它因素的影响,所以被用来作为参照,就是内参的意思
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问
co-ip的两个问题
汤姆卜丽波
位置不同可能是收到了重链的干扰。避免干扰可以使用IPkine二抗,增加Input和IP泳道上样量,减少曝光时间,以及阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。
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问
请问脂血样本对ELISA实验结果有什么影响呢
汤姆卜丽波
不同程度的脂血标本对 ELISA 法检测结果的影响具有很大影响,会出现吸光度高的假阳性,容易出现误诊
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问
关于二胺氧化酶标准曲线的建立
dxy_rapyjl86
您好,请问这个问题您研究出来了吗
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问
wb 分离胶里面没凝好
bamboopiggy
实在不放心,就延长一下等待时间,一般混匀了,不会出问题的
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问
肝星状细胞提取
天一湖医者
1. 大鼠腹腔麻醉后在超净台上剖腹,进行门静脉插管。2. 以D-Hanks‘液灌注,同时剪开下腔静脉,冲掉血液后,改灌以100 ml 酶消化液I(0.05% IV 型胶原酶)。 3. 待肝脏变软后,离体肝脏并剪碎,继续以酶消化液II(含20U/ml DNase I 的0.05% IV 型胶原酶)消化15 min,尼龙网过滤后以450 g 离心5 min(4℃,下同)。4. 以HBSS 重悬沉淀至
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问
求助|大家有用聚乙烯醇自己配抗淬灭封片剂的吗,请问所需溶剂及比例
bamboopiggy
配方包括:聚乙烯醇、甘油、重氮双环辛烷、金属离子螯合剂、碳酸盐缓冲液、Tris‑HCl缓冲液、防腐剂、水。这个现在很便宜,建议直接买了省事。
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问
THP-1诱导后消化
汤姆卜丽波
试试用胰酶加0.3-0.5%的EDTA,消化个七八分钟,拍一拍
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问
慢病毒感染THP-1后,细胞贴壁严重
dxy_giwowhk7
同学您好,我想问问你们现在这个问题解决了嘛?怎么解决的呀?我们现在也出现了这个问题?THP1一感染慢病毒就贴壁
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问
新手co-ip相关实验遇到的三个问题。希望能得到大佬的帮忙,万分感谢
汤姆卜丽波
input出不来可能是试剂准备上就有问题,也有可能蛋白不表达,而位置不同可能是收到了重链的干扰。避免干扰可以使用IPkine二抗,增加Input和IP泳道上样量,减少曝光时间,以及阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。
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