小彭友1IS5
看小老师做实验,孵一抗用的是GAPDH,但是查了GAPDH是内参,这两个有啥本质区别吗,师姐又跟我说内参就是一抗,混乱了,求大神解惑
whilt-shirt
一抗有很多,常规说的内参就是说的一抗,你的目的蛋白也是一抗,一抗是一个大类的统称
balalaLy
要先理解什么叫内参。GAPDH跟你的目的基因一样,都是细胞中表达的某种蛋白,只不过GAPDH在诸多细胞中都有表达且表达量不容易受其它因素的影响,所以被用来作为参照,就是内参的意思
yanlai000
内参即内部参照,一般是指由管家基因编码表达的蛋白,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。内参也得孵育一抗、孵育二抗、曝光显影啊,难道只做目的蛋白不做内参了吗,,,意思就是内参蛋白和目的蛋白都要分别孵各自的一抗,不知道这下明白没
bamboopiggy
你就把gapdh理解为一个蛋白,做wb,针对蛋白的抗体叫一抗,针对一抗的抗体叫二抗。至于内参的说法,是因为gapdh属于管家基因,表达比较稳定,可以作为一个蛋白表达的杠杆来衡量别的基因的表达量,所以才把gapdh叫做内参。
秋秋欣欣
内参是GAPDH那么孵一抗就要用对应的GAPDH的一抗啊
丁香清香
一抗就是你要检测的目的抗体。GAPDH作为内参的话,也是要孵它的一抗