请教跨膜蛋白的原核表达、分离、纯化
夜空明月
各位战友：最近准备构建一个跨膜蛋白（受体）的原核表达质粒，计划做体外磷酸化分析位点。
在构建质粒时，公司回复，蛋白4千多个bp，GC序列48%以上，需要截短。且跨膜蛋白一般表达不成功，需要把跨膜区截掉。
请问：1. 是否像公司说的那样，跨膜蛋白普遍做体外表达纯化，不会顺利？
2.跨膜受体的研究，功能区段在胞内片段（即激酶活性片段），能否仅构建胞内片段的表达质粒，用于研究体外磷酸化位点的分析。
4 个回答
dxy_w81ivha7
有帮助
同学 可以原核表达出来吗 你做出来后打算研究什么
汤姆卜丽波
有帮助
也不是做不出来，我看到很多做跨膜蛋白功能的都会做体外纯化，可以再仔细和公司沟通一下
bamboopiggy
有帮助
是，一般做原核表达，会选择去掉跨膜区，带跨膜区确实不好做。你可以构建胞内段的表达质粒，进行表达，用于研究。
秋秋欣欣
有帮助
由于膜蛋白的一些特性，使它和普通蛋白相比纯化更具有难度。
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