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        请教跨膜蛋白的原核表达、分离、纯化

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        夜空明月

        各位战友:最近准备构建一个跨膜蛋白(受体)的原核表达质粒,计划做体外磷酸化分析位点。

        在构建质粒时,公司回复,蛋白4千多个bp,GC序列48%以上,需要截短。且跨膜蛋白一般表达不成功,需要把跨膜区截掉。

        请问:1. 是否像公司说的那样,跨膜蛋白普遍做体外表达纯化,不会顺利?

        2.跨膜受体的研究,功能区段在胞内片段(即激酶活性片段),能否仅构建胞内片段的表达质粒,用于研究体外磷酸化位点的分析。

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        4 个回答

        user-title

        dxy_w81ivha7

        有帮助

        同学 可以原核表达出来吗 你做出来后打算研究什么

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        也不是做不出来,我看到很多做跨膜蛋白功能的都会做体外纯化,可以再仔细和公司沟通一下

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        是,一般做原核表达,会选择去掉跨膜区,带跨膜区确实不好做。你可以构建胞内段的表达质粒,进行表达,用于研究。

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        由于膜蛋白的一些特性,使它和普通蛋白相比纯化更具有难度。

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