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肿瘤组织提蛋白跑WB不齐
balalaLy
组织取出来后称重,每个组取等质量的组织
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问
input有带,但是ip部分互作的部分没有带
balalaLy
如果确定蛋白有互作的话可能是提蛋白的过程出了问题,比如所用的裂解液太强了,影响了两个蛋白的结合导致拉一种蛋白的时候另一个没有一起拉下来
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问
做蛋白半定量怎么能标定的一致?
bamboopiggy
用内参,内参一般用的是管家基因,但是不同的处理,可能需要选择不同的内参
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问
在跑wb的时候,条带都连到一起变成一条线是怎么回事?
bamboopiggy
孔太密了,上样量太大了,导致感觉连到一起了
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问
请问WB条带出现中间部分空白是什么原因?是转膜导致的吗?
balalaLy
如果是圆的那种空白就是转膜的时候有气泡。
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问
如果蛋白部分发生磷酸化使用普通的一抗所呈现的蛋白条带包含磷酸化后的蛋白吗?
bamboopiggy
您所谓的普通抗体是指的total的抗体吧?total抗体包含所有的修饰后的蛋白和未修饰的蛋白。
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问
做WB实验时一侧条带比另一侧条带浅是什么原因?
bamboopiggy
转膜没转好,三明治夹心的夹子可能变形了,或者是抗体加的不匀,
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问
样品-80度保存,7天前做过条带有 前天再做条带很模糊,怀疑一抗失效把显过影的这张膜敷了一次新配的一抗还模糊 一直用预制胶。为啥
balalaLy
虽说反复冻融蛋白会降解,但经验证明冻融个4,5次是没有多少影响的。所以你的这个应该不是样品的问题,抗体和预制胶的问题比较大。预制胶虽然是商品化的,但是也不是万无一失的。要敢于质疑
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问
配好的SDS PAGE胶,分离胶和浓缩胶之间总是有气泡咋搞?
养点鱼吃火锅
分离胶做完后加无水乙醇找平,等凝固以后倒掉,把无水乙醇吸干了吗?或者是配胶的配比不对?
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问
P后跑胶做的银染结果怎么分析?
bamboopiggy
说明你IP可能是拉下来了一个蛋白,可能需要送去打质谱。
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问
各位大佬,帮帮忙,我这个wb条带怎么回事?
Eason老歌迷
一片狼藉啊!你显影前,先把板子擦一擦,是不是残留的显影液。然后你这个是不是上样量的问题,或者是你的洗膜时间太短。
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问
新配的WB一抗才用一次就有沉淀
汤姆卜丽波
是不是用的溶剂有问题,保证溶剂不污染
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问
该怎么设计实验呢?
天一湖医者
如果A不是基因表达产物,只是外源物质,可以通过时间和剂量效应实验证实A对B的直接调控,如果A调控B具有时间依赖性和剂量依赖性,则A调控B表达结论成立。
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问
请教Proteome profiler array是什么分析
汤姆卜丽波
Proteome Profiler即血管生成蛋白芯片抗体,芯片为同时检测单个样品中多个分析物的相对水平提供了一种快速、灵敏而又经济的工具。这种芯片的使用不需要特殊的仪器,也不需要进行多个免疫沉淀或者Western blot实验。每个芯片在设计时都采用精心挑选的捕获抗体,并在硝酸纤维素膜上重复点样两次。这些膜与实验样品以及包含生物素化检测抗体混合物共同孵育,随后加入辣根过氧化物酶(HRP)偶联的链亲
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问
【求助】如何判断 Stripping Buffer 的洗脱效果?
Eason老歌迷
就我的经验来看,时间越久、次数越多、温度越高,洗脱的效果就越强。你可以通过以下方法来判断效果,先试试只洗一次,如果洗不掉,可以尝试升温和延长洗膜时间。你可以看哪个抗体条带染得最深最不好洗,你就用它开刀
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westrn blot新手,请各位帮忙看看目的条带上为啥有这么多黑点
Eason老歌迷
一般不会出现这么多黑点点,你这个是封闭液的牛奶没混匀吗,取的上清液吗?或者你是不是抗体没孵均匀啊!你放摇床上摇了吗?
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WB条带跑不出来
Eason老歌迷
嗯,wb就是一个连续的步骤繁多的实验,它其实不难,但是如果其中一个步骤出错,就会显影不佳,得不到你想要的好结果。首先你先回忆一下,你的实验过程,你提蛋白怎么提的,……然后你不行就换一个蛋白是不是实验效果,如果还跑不出来,就可能是你的实验设计问题。
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问
ros荧光探针
汤姆卜丽波
根据你的荧光,重新设置一下激发光长度
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问
WB蛋白孵育
汤姆卜丽波
试着缩短一点一抗的孵育时间,多洗几遍看会不会好一点
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问
溶解曲线异常
Eason老歌迷
可能有几个原因。主峰前面出峰的话,是引物二聚体,而如果主峰后面出峰的话,一般的是非特异性的大片段的扩增。改变引物浓度,退火温度和镁离子浓度试一试。
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