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        WB条带跑不出来

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        kyxb00

        想问一下大家有没有跑c-caspase3的方法呀?(一直跑不出来,不知道问题出在哪,给药48h,镜下细胞凋亡特别明显。用的15%的胶,200mA转膜40min)

        还有一个问题,我还跑了一个A蛋白,在其中一个细胞中可以跑的出来,但是同样的操作,同样的抗体,在另一种细胞中就跑不出来,请问是为什么呀?

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        4 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        嗯,wb就是一个连续的步骤繁多的实验,它其实不难,但是如果其中一个步骤出错,就会显影不佳,得不到你想要的好结果。首先你先回忆一下,你的实验过程,你提蛋白怎么提的,……然后你不行就换一个蛋白是不是实验效果,如果还跑不出来,就可能是你的实验设计问题。

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        可能在B细胞里本来你的蛋白表达量就低

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你换个抗体试试,一般大公司的抗体还是可以用的。然后转膜时间可以稍微长点,200mA 转1h吧。至于那个蛋白A,可能你另外一个细胞确实表达量低,或者是收样有问题。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        可能是收细胞的时候蛋白表达不足或者已经降解了,多设几组不同时间点收细胞吧

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