实验问答21,855,101 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问转染效率问题！！！

dxyv9281

应该先做REALtimePCR检测一下，如果确定低了，然后再做蛋白水平的检测

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问提rna的同时怎么把蛋白也提取出来？

bamboopiggy

有kit可以，酚氯仿抽提后，上层是rna，中间的白片是dna

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问跑胶的时候总是跑不好，有拖尾现象，怎么样才能避免呢？

bamboopiggy

配胶的TAE要用带rna酶清除剂的水配，跑胶的也是如此

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问新手小白第一次如何设计siRNA、shRNa相关序列？

bamboopiggy

第一次，最好是按照参考文献来，你做的rna一般应该有人做过。如果实在没有，有在线的si和sh的设计软件可以用，thermo官网上就有

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问含脂肪较多的样品如何提高RNA质量？

guoyanli0000

氯仿反复抽提，离心后分离可得到高RNA质量

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问用dsRNA干扰后，应该根据什么选择检测干扰效果的实验呢？

小小袋袋

pcr测一测目标rna的表达情况，wb检测目标蛋白的表达情况，有改变后还可以考虑流式

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问RNA定量上样的相关问题

刹那芳华2333

排枪校准好，调好不会有很大误差

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问请教关于吉姆萨染色实验的问题

bamboopiggy

注意吉姆萨燃料的浓度，可按照原来的浓度（引起皱缩的浓度），稀释后再用

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问Transzol提取RNA

xiaojie17

我也遇到过，老师说是杂质没去干净，或者rna太多了。最后测纯度确实是杂质没去干净。

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问反义RNA的制备中，如何去掉乙醇溶液？

bamboopiggy

乙醇洗涤rna沉淀后，分三次离心，第一次用1ml的枪尖吸，然后再次离心，用200ul的枪尖吸，第三次用10ul的枪尖吸，看着沉淀，逐渐由白色变为透明即可，当然也有人用65度加热5min来干燥，但是一般不推荐

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问哺乳动物细胞胞质分离RNA时，如何去掉污染的DNA？

花匠是自己

1.添加gDNA remover，这样后续可以直接做逆转！2.如果你是大量样品准备做组学，可以用不同的吸附柱提法，有试剂盒是先柱吸附DNA，去除DNA，再另外的柱吸附RNA，最后洗下来比较纯净的RNA。

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问CsCl法从培养细胞中提取RNA时，RNA 的产量低的原因？

Amor良

1 ) 组织或细胞中 RNA 含量偏低：不同细胞或者组织中RNA的丰度不一样，RNA提取量也不一致。2 ) 样品起始量太少或者太多：样品起始量太少，则细胞组织中RNA含量较低，样品过多则超过裂解液的裂解能力，使得裂解不完全，从而RNA得率低。

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问RNA提取时，OD260/OD280比值偏低

仗剑走江湖

比值偏低，说明有蛋白污染；补救办法trizol法上清吸取少点300ul即可；异丙醇吸干净；酒精挥发干

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问细菌提RNA，需要培养到什么时期最好？

lzy必有我师

1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个

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问用于反转录PCR的RNA浓度范围是？

xiadongliang

反转录问题应该不大，1ug的RNA template实在是太多了。去哪儿弄那么多做反转录啊。可能是你设计的引物不太好，扩增存在非特异性条带。

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问细胞冻存液DMSO浓度是10％还是20％？

丁香实验

DMSO不能超过10%，因为有细胞毒性，一般都采用10%，血清一般用30%到40%，当然再多一点血清也没有坏作用，只是浪费而已。一般来说，DMSO：血清：培养基的体积比为1：3：6或1：4：5。冻存液最好现配现用，不易放的时间过久（一般不超过一个月）。但刚配好的冻存液会产热，需放置一会才能用于悬浮细胞。冻存细胞（以50ml培养瓶）时，先将冻存液按DMSO：血清：培养基的体积比按1：4：5配好，再处

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问RNA提取中的问题

老鹰归来

75%的乙醇哦亲，室温即可哦亲。配置75%乙醇的水必须经过DEPC处理哦亲。原理：之所以用乙醇是为了让RNA析出哦亲，之所以不用纯乙醇而用75的乙醇是为了溶解RNA提取过程中的胍盐等可溶杂质哦亲，用纯乙醇而不用75的乙醇洗涤RNA会导致最后260/230的比值小于2.0哦亲。260/230低于2.0可以做反转，定量，但是不可以用于测序哦亲。提问者：那也就是说最后一步非要用带水的乙醇对吧，其实真正起

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问RNA提取，rtPCR和qPCR碰到的问题

wangqing2020

取完一个标本后，趁研钵还是很冷的状态下，向研钵中加一勺（用不锈钢的小汤勺即可）液氮，立刻用研棒搅动样品，趁样品飘在液氮中，将样品和液氮一起倒到锡箔纸做成的小碗中（用来收集废样，便于丢弃）。如果一次洗不干净，可以多洗两遍，我都是这样做的，一般洗两次就很干净了。

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问如何灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解？

丁香实验

以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活：（1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。（2）用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活（3）立即将样品置于RNAlater? Tissue Collection：RNA Stabilization Solution中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未

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问细胞RNA提取时trizol的量是多少？

dxy_za0jbge8

300μl细胞液＋700trizol

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