实验问答21,906,512 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问多重qPCR怎么样可以在一个反应条件下达到最优

土井挞克树

考虑是质粒没选好，才会扩增效率低

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问急急急，求助！endnote打开后原来的文献全都不见了，怎么回事？

loveliufudan

可以试试用recovery my files软件（或者类似的恢复软件）查找一下，看看有没有恢复的可能。

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问中国医药投稿

loveliufudan

审稿时间是可以有变化的，因为有很多的因素影响着审稿的速度，例如审稿人的工作量、审稿的难度以及编辑的工作计划等等。如果一个月已经过去了，那么您可以联系该杂志的编辑，询问审稿的进展。如果编辑告诉您审稿进展缓慢，您可以考虑投递到其他杂志。但是，在决定换杂志之前，请认真考虑其他因素，例如该杂志的影响力、发表论文的时间、审稿难度等，以决定是否真的需要换杂志。

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问请教QPCR 上样顺序？

balalaLy

中途不需要离心的，全部加完贴膜之后再离心就行了。

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问qpcr的3个复孔，其中一个cq值>0.5但是<1的孔可以纳入计算吗？

loveliufudan

Cq值的差距决定了是否可以纳入计算的标准。通常，差距小于0.5表示检测效率较高，可以纳入计算；差距大于0.5则说明检测效率较低，不可以纳入计算。对于Cq值差距为＞0.5但是<1的孔，具体是否可以纳入计算需要根据实验具体情况判断。如果不确定是否纳入计算，可以考虑重新检测或使用其他方法来确定Cq值的正确性。

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问想问一下一个分子在有的不同癌种有的促癌有的抑癌怎么理解呢？在同一癌种不同细胞系也是有的表达增高有的减低，怎么理解呢？

huarenqiang5

因为有很多基因存在完全相反的趋势。表现出双重效应，当出现促癌和抑癌双重机制时，具体到每个个体，就取决于这两种效应强弱竞争的结果。哪种效应占上风就表现为哪种效应，但在有些癌种中，则表现出双重效应。

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问引物设计求助！！！

xijun_song

什么基因？可以帮设计引物，欢迎交流。

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问PCR-SSP操作步骤？

bamboopiggy

其实，你在丁香通上可以看到原理和步骤的。[实验原理]根据决定某等位基因的碱基性质，设计3′端第一个碱基分别与各等位基因的特异性碱基相匹配的序列特异性引物，在PCR 反应过程中，只有引物3′端第一个碱基与决定特定等位基因的碱基互补时才能实现DNA 片段的完全复制，根据PCR 产物的有无进行等位基因的分型。重点是在引物设计

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问PCR胶孔附近是杂带吗？

dunima

也有可能是蛋白污染，可以再往下跑跑看

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问qpcr内参不齐怎么办

loveliufudan

1.qPCR内参不齐可能是由于实验条件不稳定或试剂不纯导致的。在进行逆转录之后再测定MA浓度可能不能解决问题。建议检查实验条件，确保试剂纯度，并考虑使用其他内参。2.如果std值为0.3，可能表明实验的结果具有较大的不确定性。因此，这些数据可能不能用于进一步的分析。建议重复实验或改进实验条件以减少不确定性。3.建议重新评估实验条件，确保试剂纯度，并考虑使用其他内参。如果问题仍然存在，可能需要重新设

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问如果引物探针有漏检的基因型，如何进行具体的优化？

loveliufudan

引物探针有漏检的基因型可以通过以下几种方法进行优化：1.改变引物设计：通过更改引物的长度、碱基序列等参数来提高引物的特异性和敏感性。2.改变扩增条件：试验不同的扩增温度、扩增时间等参数，来提高扩增效率。3.使用多种扩增方法：在不同的扩增条件下，使用多种扩增方法，如多重PCR、long-range PCR等。4.改变探针浓度：试验不同的探针浓度，来提高探针的特异性和敏感性。5.引入新技术：如CRIS

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问多重qpcr,FAM通道的荧光强度明显高于其它通道

土井挞克树

我更倾向于背景调节的问题，可以把基线调宽再做

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问miRNA及mRNA引物设计

bamboopiggy

可以先试试，如果不起作用再改。一般设计miRNA和mRNA的引物只区别物种

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问多重检验问题

此用户已注销

应该是的，多因素回归分析时自变量直接存在相关性，或者很多时候我们说是多重共线性（即使程度很轻）。

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问请问pcR大神核酸CT值

勇往无前G66G

有影响，取样要尽量完美操作，提高纯度。

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问设计引物时酶切位点的保护碱基一定要在两侧加吗，酶切后的残留碱基要添加保护碱基使之是3的倍数吗？

bamboopiggy

设计保护碱基一般是2-3个就可以，主要为了平衡primer的GC含量

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问【求助】小分子化合物作用机制研究

loveliufudan

设计一个小分子化合物促进细胞分化成熟是一个很有意思的课题！细胞分化是指细胞在发育过程中不断地调整自身的功能和形态，以适应其生命周期中不同的需要。小分子化合物可以通过调节细胞内的生物信号路径来促进细胞分化。首先，你需要确定你想要促进的细胞分化过程。这可能是神经元分化、心肌细胞分化、血管内皮细胞分化等。然后，你可以研究相关的生物学机制，如哪些信号路径对于该细胞分化过程至关重要。接下来，你可以考虑使用药

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问qpcr之前必须先做琼脂糖电泳吗？

dxy_y9nrs2t6

qpcr的电泳有两个目的：1、是验证引物扩增效果，不过这个在qpcr实验之前，引物到了就可以安排预实验了；2、验证rna的完整性，超微量紫外分光光度计只能检测浓度和纯度，对于rna是否降解是无从得知的，需要通过电泳条带来判断

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问一个疑问：熔解曲线有 2 个或 2 个以上的峰如何解决

此用户已注销

是不是引物二聚体，你做个阴性对照（只加引物，不加模板）就知道了。不过看峰的位置，是非特异的扩增，与你的引物或者cDNA有关，你已经试过了多种退火温度都没有改善，说明它影响不大。

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问请问高浓度模板反而 CT值更大甚至检测不到？

曙光karry

模板浓度和纯度都会影响，如果纯度不够有杂质反而会抑制反应，另外可以大致换算一下拷贝数，初始模板10^5-10^8 copies 比较合适

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