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        多重qpcr,FAM通道的荧光强度明显高于其它通道

        相关实验:重叠延伸 PCR

        user-title

        附首儒子牛

        做的多重qpcr,发现FAM通道的荧光强度明显高于其它通道的扩增曲线,这种情况有没有解决的办法呀?

        wx-share
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        3 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        我更倾向于背景调节的问题,可以把基线调宽再做

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        如果FAM通道的荧光强度明显高于其它通道,这可能是由于以下几种原因之一或多者综合引起的:

        1.引物的不平衡结合,导致FAM通道的扩增效率高于其它通道。

        2.FAM染料的高效率荧光性质,导致FAM通道的荧光强度高于其它通道。

        3.FAM染料比其它染料更易穿过细胞膜,导致FAM通道的荧光强度高于其它通道。

        4.实验条件(如温度或pH值)导致FAM通道的扩增效率高于其它通道。


        解决方案:

        1.使用同等浓度的引物,并重新进行扩增,检查各通道的扩增效率。

        2.更换其他荧光染料,检查各通道的荧光强度。

        3.在扩增过程中保持实验条件的稳定性,如温度,pH值等。

        4.分析结果时使用正确的标准品。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        1、在选择荧光基团时要注意避免荧光基团的发射光谱之间的相互干扰。

        2、不同荧光基团的荧光强度有高有低。FAM是荧光强度相对较高的一组,所以我们更倾向于将其安排给表达相对较低的靶基因,而荧光强度相对较低的一组可以用来检测表达相对较高的看家基因。这样就达到了放大曲线平台的目的,熔解曲线会更漂亮。





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