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问
qPCR需要保证每个样本的CDNA浓度一致吗?
土井挞克树
不需要完全一致,保持稀释倍数一致很重要
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问
设置程序的时候体系是10微,实际是20微,对结果影响大吗?
z流沙z
这个问题不大,主要是程序正确就行
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问
有什么能保证3个平行孔扩增曲线一致的加样技巧吗?
z流沙z
配制成预混液,然后分到每个管里面
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问
直接提取并检测dna的话 引物设计有哪些注意的点?和那种mRNA逆转录成cDNA再进行检测所使用的引物以及设计过程是一样的吗?
土井挞克树
直接提取的话引物需要处理,比如把不翻译的修饰部分去掉。
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问
内参不齐会对结果有很大的影响吗?差距多少才算齐?怎么保证内参齐呢
伯乐生命医学产品
内参不齐会对结果有影响,影响大小与差异大小有关。不同样本的内参差距建议在10倍以内,约3.3个Ct值。起始RNA含量一致,完整性相似就可以保证内参基本一致。
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问
求教临床样本组织跑qRT-PCR的一些问题
土井挞克树
可能是pcr过程中目的基因存在降解导致结果不准确
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问
时空组学中使用 nCounter 技术作为 GeoMx DSP 空间分析下游定量技术的项目,分析过程中是否有PCR扩增?
loveliufudan
nCounter技术是一种数字式芯片技术,它使用一系列特异性的探针对RNA分子进行定量测量,而不需要进行PCR扩增。因此,在nCounter技术中,没有PCR扩增的过程。在nCounter技术中,样品中的RNA首先被杂交到数字式探针芯片的探针序列上,然后使用化学发光方法进行检测,以定量测量RNA的存在量。这种技术具有高通量、高精度和可重复性好等特点,被广泛应用于基因表达、突变检测和RNA分子互作等
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问
表面活性剂加入为什么使W/O型微液滴不稳定?
loveliufudan
在微流控制备W/O微液滴时,表面活性剂的作用是降低液滴与连续相的表面张力,从而形成稳定的液液界面。表面活性剂的作用与浓度有一定的关系,但是过高或过低的浓度都可能导致液滴不稳定。当表面活性剂浓度过低时,它不能充分地覆盖液液界面,导致液滴与连续相的表面张力较大,液滴容易破裂。而当表面活性剂浓度过高时,过多的表面活性剂聚集在液滴表面,形成高度曲率的液滴表面,这也会导致液滴不稳定。此外,过高的表面活性剂浓
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问
有大佬可以为右上这个条带出现的问题帮忙进行分析吗
Topmicro
提高退火温度或者重新设计引物序列
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问
rt qpcr试剂盒
Topmicro
温度和时间设定一般不会根据pcr仪不同而改变,根据试剂盒说明书进行设定即可,如果结果不理想再进行优化
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问
请问荧光定量跑的怎么样?
土井挞克树
峰值有重叠,可以更换特异度高一些的抗体
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问
qPCR | Undetermined
z流沙z
部分目的基因表达量低,就没有测出来,这些基因就不适合稀释
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问
求大家帮我分析分析qPCR失败的原因😭
Topmicro
提取和反转完跑个胶或者检测一下浓度
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问
关于qPCR目的无数据
Topmicro
建议重新查阅几篇文献,看看同一目的基因的引物序列是否有差异,如果有的话更换其他序列进行检测。
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3 回答
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问
MIC实验
土井挞克树
可以用96孔板,掌握好吸光度即可。
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884 围观
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问
同源重组后大肠转农杆
土井挞克树
更改质粒类型,然后提高农杆菌的含量
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问
DEPC水可以用无酶无菌水代替吗
idiotOC0P
可以代替使用。也可以用RNase固相清除剂处理过的水来用。
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问
做PCR心肌组织提取后测浓度时提示有胍的污染是什么原因?
土井挞克树
清洗不彻底,要采用涡流清洗,保证洗涤彻底
3 回答
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问
提取组织RNA测浓度时提示有苯的污染是什么原因?
idiotOC0P
提取的时候,分层之后,吸取清液吸到TRIZOL了吧。宁可少吸也别贪多,否则就容易污染。
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问
RNA纯度260/280为1.3可以做荧光定量吗
z流沙z
荧光定量本身是很灵敏的实验,这个样品可能已经有降解了,建议还是用纯度比较高的样品
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