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        直接提取并检测dna的话 引物设计有哪些注意的点?和那种mRNA逆转录成cDNA再进行检测所使用的引物以及设计过程是一样的吗?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        实验室小助理夏奇

        直接提取并检测dna的话 引物设计有哪些注意的点?和那种mRNA逆转录成cDNA再进行检测所使用的引物以及设计过程是一样的吗?

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        4 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        直接提取的话引物需要处理,比如把不翻译的修饰部分去掉。

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        loveliufudan

        有帮助

        直接提取井检测DNA的引物设计需要考虑以下几个注意点:

        特异性:引物应该与目标DNA序列特异结合,而不与非目标DNA序列结合,以避免假阳性或假阴性的情况出现。

        互补性:引物应该相互补合,即引物的5'端与目标DNA序列的3'端互补,引物的3'端与目标DNA序列的5'端互补。

        GC含量:引物的GC含量应该控制在40%-60%之间,以确保引物与目标DNA序列的互补性。

        碱基长度:引物的长度应该在18-25bp之间,以确保引物与目标DNA序列的特异性。

        对于将mRNA逆转录成cDNA后进行检测所使用的引物以及设计过程,与直接提取井检测DNA的引物设计有些不同,需要注意以下几点:

        避免污染:反转录过程中需要避免RNA污染和DNA污染。

        选择合适的引物:由于cDNA比DNA相对较短,因此引物的长度应该更短,通常为15-22bp。

        选择合适的引物位置:引物应该选择在靠近3'端的位置,以确保可以检测到完整的mRNA序列。

        逆转录反应:反转录反应需要选择合适的反转录酶和反应条件,以确保反转录反应的效率和准确性。

        因此,直接提取井检测DNA的引物设计和将mRNA逆转录成cDNA后进行检测所使用的引物以及设计过程并不完全相同,需要根据不同的应用场景进行合理选择。

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        z流沙z

        有帮助

        引物不一样的哈,因为DNA模板是DNA,有内含子和外显子,而mRNA逆转录的是cDNA,只有外显子

        user-title

        伯乐生命医学产品

        有帮助

        基因组DNA包含内含子 所以要在基因组序列而非mRNA序列上设计引物,否则有可能因不能跨越内含子而扩增失败 引物设计的原则(特异性、GC含量、碱基结构)都是一样的 。

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