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        qPCR | Undetermined

        相关实验:PCR 产物的 TA 克隆

        user-title

        陌上花开1586

        荧光定量PCR 三步法

        RNA已经标齐到1μg/μl

        逆转录之后20μl体系稀释到60μl

        为什么Undetermined和低CT值同时出现了?

        应该降低模板浓度吗?难道是降解了?图片描述

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        3 个回答

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        部分目的基因表达量低,就没有测出来,这些基因就不适合稀释

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是存在降解,不建议降低模版浓度,可以重新来一遍试一下

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        Undetermined和低CT值同时出现可能有多种原因,下面列出几个可能的原因:

        模板浓度过高。当模板浓度过高时,荧光信号会饱和,超过荧光仪的检测范围,导致CT值无法计算,同时也会导致低CT值的出现。

        质量差的RNA。如果RNA质量不好,可能会导致部分反应无法进行或引起不良反应。

        退火温度或时间不合适。不同引物的最佳退火温度不同,如果温度太高或时间太长,可能会导致非特异性扩增。

        针对以上情况,建议进行以下操作:

        调整模板浓度。如果荧光信号饱和,可以尝试将模板浓度适当稀释,再进行PCR扩增。

        检查RNA质量。使用质量好的RNA可提高反应的可靠性和准确性。

        优化PCR反应条件。尝试调整退火温度和时间,选择最适合的PCR条件。

        另外,如果出现Undetermined和低CT值,可以考虑进行再次检测,同时可以进行重复实验来验证结果的准确性。

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