实验问答21,895,155 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问请问各位，我的p21出现位置是在10分子量明显，25到15之间也有但是特浅求助各位哪个是

来一起探讨

可能是更为明显的条带，在乙酰化、甲基化、烷基化、磷酸化、糖基化等会导致蛋白条带位置的变化，或是蛋白样品可能没有充分变性，从而残留多聚体。

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问求助|想去掉质粒上的3bp，用引物进行环形pcr可以p出来吗？

是TTT

不可以删减但是可以突变，如果你只是要研究这个氨基酸的功能，突变更好

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问借鉴了别人的引物，怎么判断没有二聚体

是TTT

输入序列，用oligoanalyzer分析一下，会给出二聚体的值

6 回答3036 围观

问7500软件不能用，这个情况该怎么处理

huarenqiang5

建议重新下载并按提示安装相应的工具包及插件才能够使用。

3 回答939 围观

问PBS冻存组织可以做PCR吗？

汤姆卜丽波

可以啊，一般-80不会降解的。

4 回答455 围观

问细胞条形码，数字PCR

土井挞克树

你可以简单理解为条形码是细胞的标签，可看作一段特异序列，以此为参考设计引物做dpcr

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问小鼠组织样本做荧光定量pcr可以用人源引物吗？

loveliufudan

对于小鼠组织样本进行荧光定量PCR（qPCR），一般情况下不推荐直接使用人源引物。这是因为小鼠和人之间存在基因序列的差异，包括引物结合位点的差异，这可能会导致PCR的特异性和准确性受到影响。为了进行准确的荧光定量PCR分析，最好设计针对小鼠基因的特异引物。可以通过以下几种方式获得适用于小鼠的引物：文献研究：查阅相关文献，寻找已经经过验证适用于小鼠的引物。许多研究人员已经开发了广泛使用的小鼠引物，这

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问请教。我有一个目的片段大小在210，熔解曲线跑出的tm值达到了93，这个正常么，有人说温度越高，特异性越好，是这样么？

juyue2010

正常，这个与你扩增的目的条带gc含量有关

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问PCR扩增产物不是预期的条带，哪里出了问题？

juyue2010

可能设计引物时用的是cDNA，忽略了基因组上内含子

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问老师：做COIP实验的时候，是必须选择平时所用的某特异的细胞，还是用工具细胞也可以？

土井挞克树

最好是特异细胞，特异度高的细胞可以避免分选误差。

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问（实时荧光定量PCR）非竞争性内标定量中间的公式（从CT值到浓度）是怎么确定的？怎么建立模型？

loveliufudan

在实时荧光定量PCR中，常用的非竞争性内标法是采用外源性参比基因或人工合成的内标分子作为定量的基准，通过比较参考基因和目标基因的荧光信号差异，计算出目标基因的相对表达量。具体的公式和建模方法如下：1.构建标准曲线首先，需要在实验中构建一个标准曲线，将已知浓度的DNA模板进行反转录合成cDNA，然后进行实时荧光定量PCR，测量荧光信号与初始DNA浓度的对数之间的关系。根据标准曲线，可以通过计算目标基

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问足够量的细胞为什么获取的RNA沉淀很少呢？

土井挞克树

可能是细胞裂解的时候不充分,严重影响产量，建议增加裂解时间，必要时更换裂解酶种类

3 回答323 围观

问有序logistic回归的问题

Dr_劉医生

先剔除再放入有序logistic回归，单因素没有意义的话，多因素模型调整的话不会有阳性结果的。

3 回答396 围观

问药物作用后基因表达上调?

loveliufudan

抗菌药物作用后，有些细菌可能会通过一系列的适应性响应机制来对抗药物的攻击。这些适应性响应机制可以包括细胞壁重建、毒力基因表达和自由基清除等。在这种情况下，可能会观察到一些细菌毒力基因的上调。这是因为毒力基因编码了一些蛋白质，这些蛋白质可以协助细菌逃避宿主的免疫防御，并在感染过程中对宿主细胞造成损伤。在抗菌药物的压力下，一些细菌可能会增加毒力基因的表达，以提高其对宿主的侵袭能力，从而更好地逃避宿主免

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问同一批样本，目的基因测出的ct值20-22，但是内参的ct在35-38左右，是怎么回事？求大神解答

dxy_4aa38auq

不同实验不同细胞内参可能会有变化的，而且35-38太不稳定了，需要重新找一个，可以试试别的比如HPRT1

2 回答474 围观

问做土壤微生物的，需要定量检测土壤中某一真菌的生物量。

loveliufudan

可以通过设计特异性引物并使用qPCR技术来定量检测特定真菌的DNA含量，从而推测其生物量。具体的实验步骤大概如下：首先需要收集士土样品，将其进行粉碎和筛选，以获得较为均匀的样品。提取士土样品中的真菌DNA，可以采用商用的DNA提取试剂盒或自制方法。设计特异性引物，需要通过生物信息学方法从已知真菌的基因序列中筛选出比较保守的区域，并进行引物设计和验证。进行qPCR反应，将提取到的真菌DNA和特异性引

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问定点突变之后同源重组完毕，电泳显示有条带，为什么转化后的板子不长菌落

sswei

转化的时候有误，可以重新实验。目的基因和载体都切开，特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低；载体上两个酶切位点连在一起，感受态的效率问题，转化过程对不对，如抗生素加的对不对。

3 回答1278 围观

问qpcr结果分析求问

dxy_t3td6v30

样品没问题，可能是引物扩增效率不行，或者循环数不对。

6 回答628 围观

问想要做细菌的定量pcr，细菌常用的内参是什么

loveliufudan

在细菌定量PCR实验中，常用的内参包括：16S rRNA基因：这是一种高度保守的基因，在细菌中广泛存在。在细菌中，16S rRNA基因的序列差异很大，因此需要根据目标细菌的种类选择合适的引物和探针。rpoB基因：这是一种编码细菌RNA聚合酶的亚基的基因，也是一种广泛存在且高度保守的基因。gyrB基因：这是一种编码细菌DNA旋转酶亚基的基因，也是一种常用的内参。

4 回答12402 围观

问以昆虫cDNA为模板进行PCR无法克隆目的片段

桃之zbx

有可能DNA浓度过低，有没有测过DNA浓度呀酶有没有把目的片段切碎呀PCR的温度和时间调整一下直接送公司测一代看看能不能测出来，反馈结果是什么

3 回答666 围观

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