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        PCR扩增产物不是预期的条带,哪里出了问题?

        相关实验:任意引物 PCR

        user-title

        啊啊哈哈哈1

        模板是基因组,目的条带800bp,扩出来跑胶没有800bp的条带,反而有个2000+bp的条带,这是为什么啊?如果是有非特异性扩增,那也不会一点也没有我的目的条带啊?


        注:

        怕自己加错了试剂和模板,重新pcr了两次,结果一样。

        目的基因、引物也检查了,都没有问题。就是不知道会不会是非特异性扩增。

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        3 个回答

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        可能设计引物时用的是cDNA,忽略了基因组上内含子

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可能是扩增产物产生了聚合,跑出来的条带是多聚体条带

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        对于你的情况,没有得到目的条带而出现了2,000bp的条带,有可能是引物选择不当或者PCR反应条件不当造成的。此外,也可能是反应体系中存在非特异性扩增,但是即使存在非特异性扩增,也应该至少能看到一些目的条带。建议重新检查引物序列、PCR反应体系、反应条件,并尝试优化PCR反应条件来寻找产生目的条带的最佳反应条件。如果还是不能解决问题,可以考虑使用其他方法检测你的样品。

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