• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        菌液PCR

        相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

        user-title

        dxy_yns7wj60

        DH5α感受态转化后在amp抗性的板子上长了,挑去菌落进行菌液PCR有目的条带,但之后扩大培养液体摇菌却没摇出来怎么回事?已经重新配了液体LB又摇了一次还是没结果,和引物设计的不好有关吗

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        灵枢天问

        有帮助

        有可能是连接失败你转化的时候菌液带上了片段,那挑单克隆就有可能会挑到

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是可能导致这种情况发生的几个可能原因:

        1. 细菌发展的时间:摇菌的时间可能不足以让细菌在液体培养基中扩增到足够的数量。摇菌的时间通常是根据细菌种类和培养条件而定,您可以尝试延长摇菌时间,例如摇菌过夜。

        2. 抗生素浓度:请确保您在液体LB培养基中添加了足够的抗生素(如ampicillin)以保持选择压力,防止非转化菌的生长。请确保抗生素的浓度适当,并且没有过期。

        3. 培养基配制:请确保您正确配制了液体LB培养基,包括正确的成分比例和pH值。确保培养基的质量和新鲜性。

        4. 培养条件:注意培养条件,如温度、摇床速度和培养瓶密封性。这些条件对于细菌的生长和扩增至关重要。

        关于引物设计,如果您在菌液PCR中观察到了目的条带,这表明引物设计可能是有效的。引物的特异性和有效性通常可以通过测序验证。

        综上所述,您可以尝试延长摇菌时间、检查抗生素浓度、确认培养基配制和优化培养条件,以提高细菌在液体培养基中的扩大培养效果。此外,定期检查和验证实验室设备和试剂的质量和有效性也是很重要的。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是引物特异度不高所以摇不出来,建议更换特异度高的引物

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序