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科研学霸天团，48小时有问必答

问 pcr产物双酶切后连接只长出原载体，请问哪里出了问题

高山云初

可能是酶切失败，内切酶特异度不足导致的

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问pcr产物送测序DNA有要求吗

此用户已注销

DNA浓度没有到50可以的，但是不能太低

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问pcr产物双酶切后连接只长出原载体，请问哪里出了问题

周末也要努力呀

推测可能出现以下几种情况：1. PCR产物没有成功双酶切：请确保PCR产物已经成功进行了酶切反应，并且使用了正确的酶切酶和相应的缓冲液。2. 双酶切产物没有经过凝胶电泳纯化：在连接之前，需要将双酶切产物进行凝胶电泳分离，并纯化目标片段，以去除其他杂质。3. 连接反应条件不正确：连接反应需要使用适当的连接酶和缓冲液，并在正确的温度和时间下进行。请确保连接反应条件正确。

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问pcr扩增实验条带很大不是目的条带？

huarenqiang5

可能是电泳的时候参数设置问题，其次就是特异性检验，把引物放到ncbi里面去blast一下，看看引物特异性如何，要是特异性不好，需要重新设计引物。

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问常规pcr扩增实验问题

李亚彪111

个人愚见，左边引物设计不合理，右边引物有杂交

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问pcr扩增目的条带上有一条淡淡的条带？

Keven轩

应该是由于引物特异性不足引起的错配，导致扩增出目标条带以外的条带

5 回答1161 围观

问常规pcr扩增跑不出来什么原因？

土井挞克树

考虑是模版的问题，建议更换模版后再做

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问秀丽隐杆线虫为什么会钻进培养基

周末也要努力呀

固体培养基你倒的时候薄一点试试

3 回答573 围观

问RNA琼脂糖无条带求解决方法

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因和建议:1.样品制备不当样品制备是影响琼脂糖凝胶电泳结果的重要因素之一。如果样品制备不当，可能会导致琼脂糖凝胶电泳没有条带。例如，DNA样品的纯度不够高、浓度过低或过高、RNA样品的完整性不好等。解决方法:在样品制备前，应该仔细阅读相关文献，了解样品制备的方法和注意事项。同时,应该对样品进行质量检测,确保样品的纯度、浓度和完整性符合要求。2.电泳缓冲液配制不当

5 回答5958 围观

问southern blot 出现这种情况是什么原因？

feixue7758527w

背景很脏，没有明确的条带，原因很多，首先你的蛋白提取可能不是很纯，然后抗体是不是有问题，我觉得抗体的可能性很大。其次就是封闭的牛奶是不是不太好。这几个方面建议再推敲一下。

4 回答345 围观

问求助传统过碘酸钠法标记碱性磷酸酶

高山云初

都是需要做的，提高实验成功率。

3 回答605 围观

问请问这些有点透明的是不是噬菌体的噬斑呀，科研小白很迷茫

sswei

在琼脂培养基表面形成的肉眼可见的透明小圆斑即是噬菌斑

4 回答497 围观

问做GSEA富集分析之前，可以先筛选差异基因吗？

秋秋欣欣

可以的，如果你基因比较多的话。

3 回答521 围观

问载体构建，没扩出来单片段

土井挞克树

还有可能是连接失败或者产物降解

4 回答259 围观

问琼脂凝胶电泳产生微笑条带怎么办？这是酶切电泳，第一列DNAmarker，第二列双酶切产物，第三列原质粒。电压120V21min。

周末也要努力呀

微笑条带是你的胶没匀，制备前涡旋混匀

7 回答1688 围观

问重组的plenti载体可以在大肠杆菌内表达吗？

huarenqiang5

可以。重组的plenti载体可以在大肠杆菌内表达。

5 回答412 围观

问纯肽与钙螯合时，加了9倍的无水乙醇但是没有螯合物沉淀下来是什么原因呢

huarenqiang5

建议将100mg肽超滤组分溶解于5ml去离子水中，在50℃、ph8.0的条件下，置于恒温加热磁力搅拌器中，然后加入100mg的无水氯化钙并用保鲜膜封口，在恒温震荡条件下搅拌1h;反应完成后加入9倍体积的无水乙醇静止3h。

4 回答740 围观

问卡那霉素抗性基因的启动子是什么呢？

土井挞克树

建议你去ncbi网站上进行搜索。输入卡那霉素然后搜索启动子

5 回答4683 围观

问关于单细胞测序

dxy_mqg1dtg8

单细胞测序在血液病领域具有广泛的应用价值。以下是一些可能的方向：1. 了解血液病的病理机制：单细胞测序可以帮助研究人员探究血液病的病理机制。例如，单细胞测序可以帮助鉴定癌细胞和正常细胞之间的转录差异，以及基因表达水平和细胞类型之间的关系。2. 识别血液病的亚型和分子标记：单细胞测序可以帮助鉴定血液病的亚型和分子标记。例如，单细胞测序可以帮助研究人员识别癌细胞的特异性表达基因，从而为临床治疗提供更精

4 回答520 围观

问限制性内切酶的奇怪问题

dxy_mqg1dtg8

这种情况可能是由于GGATCC的酶切位点与GGTACC的酶切位点具有相似度，导致在实验中发生了错误的酶切和连接。虽然GGATCC并不是理想的KpnI酶切位点，但由于GGATCC与GGTACC有相似的序列，可能在一定程度上被KpnI酶识别并切割。这种情况下，片段虽然没有按预期的方式被切开，但仍然能够与载体连接上。这种情况的发生可能是由于酶切位点设计时的误差或实验操作中的错误导致的。在设计引物时，建议

3 回答1039 围观

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