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        载体构建,没扩出来单片段

        相关实验:质粒构建技术

        user-title

        dxy_leon9r48

        图片描述

        构建敲除载体,但是扩单片段的时候PCR没有条带,除了引物问题还可能是什么原因呢?

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        4 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        还有可能是连接失败或者产物降解

        user-title

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        有帮助

        1.变性温度是否准确:PCR 仪指示温度与实际温度是否相符,过高酶在前几个循环就迅速失活;过低则模板变性不彻底。

        2.反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶,应在未加 Taq 酶以前,将反应体系 95℃ 加热 5~10 分钟。

        3.引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化,或因储存条件不当而失活。

        user-title

        粥辰辰辰辰

        有帮助

        .

        1酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。

        2.

        模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,造成 DNA 脱嘌呤而影响 PCR 的结果。

        user-title

        高山云初

        有帮助

        酶的品质(主要是公司的工艺好不好),活性,保质期,buffer的冻融程度都会很大程度影响PCR扩增。因此,换一个酶是相对简单,必须试用的方法。

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