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实验问答23,877,432 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

DNA

问提取RNA前，发现Buffer GTC有沉淀物，怎么办？

天一湖医者

如果在加入异丙醇之后就有沉淀，这肯定是蛋白质。也可能是无机盐沉淀，什么碳酸钙之类的因为，不溶于水，又不溶于75%的乙醇。

3 回答484 围观

问测序结果中有时候为什么找不到引物序列?

Eason老歌迷

用PCR引物作为测序引物进行测序时，所测序列是从引物3'末端后第一个碱基开始的，所以自然就找不到您的引物序列了。有两种方法可以得到您的引物序列。对于较短的PCR产物（<600bp），可以用另一端的引物进行测序，从另一端测序可以一直测到序列的末端，就可以在序列的末端得到您的引物的反向互补序列。对于较长的序列，一个测序反应测不到头，因此就只能将您的PCR产物片段克隆到适当的载体中，用载体上的通用

3 回答2982 围观

问为什么需要使用无水乙醇来沉淀DNA?用95%乙醇可以吗？

bamboopiggy

原因：1.DNA不溶于乙醇2.乙醇可以吸附水分子（极性相同）,使得溶液中相对的水分子减少,增大了DNA在水中的相对浓度.3.附：乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全.可以用95%的，就是会增大液体的体积

5 回答6776 围观

问质粒构建整个流程和软件

juyue2010

snapgene软件不错，简单易学，功能齐全

6 回答1004 围观

问求各位大神解答？我的质粒浓度240纳克每微升，酶切后线性化载体条带就很弱，目的条带200bp直接看不到，这怎么解决呢？

n0y0j7

为什么要切这个？连之前不用看小的，大的切完全就行了。连之后筛选阳的直接测序啊

8 回答1096 围观

问我想知道这个图怎么分析啊！有大佬嘛！

天一湖医者

构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如 pGL3-basic 等。将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染HEK293T细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是

2 回答452 围观

问请问如何防止植物原生质体细胞贴壁生长？

迟C迟

用缓冲液轻轻吹打，混合均匀再吸取转移，千万手法要轻，原生质体失去细胞壁非常脆弱。或者可以多做几管，只要收集到你够得细胞数量就可以了。

3 回答575 围观

问5000多bp的载体和5000多bp的目的片段连接体系？

天一湖医者

一般情况下载体与片段的摩尔比建议为1:3。

3 回答862 围观

问在跑琼脂糖电泳时条带有拖尾，无法判断是纯合子还是杂合子，怎么避免这种情况？

bamboopiggy

感觉你提高一下琼脂糖胶的浓度，尽量拉开两条带，实在不行就加阳参吧。和阳参同一水平的，就是纯合子，否则杂合子

2 回答945 围观

问在跑琼脂糖凝胶电泳时候只有Marker拖尾

天一湖医者

电泳体系的问题：观察你的marker是否也存在拖尾现象，作为对照（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染：。建议更换缓冲液。（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。（3）电压太高：适当降低电压（4）根据核酸片断大小，适当把加大凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb 的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%, 分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度

2 回答6143 围观

问请问基因合成的目的片段后续该如何进行实验

bamboopiggy

是需要自己转入感受态先扩增一下的，然后小提就可以，几百ng/ul，30ul就足够用了

1 回答280 围观

问gateway clone实验老是失败，要么不长斑，要么长的斑提出来质粒无条带。想请教各位大佬是什么原因？

一个小哭包

培养条件，染菌问题。提质粒也有可能出现问题

4 回答625 围观

问用放射性碘标记抗原，131和125I与化合物结合时怎么尽可能增加碘化效率，怎么增加被标记蛋白质的活性？

天一湖医者

第一，要尽量保持产物的天然结构，避免使用过于剧烈的手段纯化，如避免使用有机溶剂，SDS，尿素等使蛋白质变性的物质，尽量在低温下进行分离纯化，也要避免产生过多的泡末，避免过度搅拌。第二，要尽量提高其纯度。

2 回答468 围观

问核酸斑点杂交，只有中间一列显色很深，是说明其他的探针灵敏度不行吗还是显色剂用量不够。

bamboopiggy

可能是探针灵敏度不够，显色剂是一起加的，别的地方有显色，就不是显色剂的问题。

1 回答364 围观

问为什么同样的植物不同人提的DNA，相同的引物，相同的体系，相同的PCR时间温度，跑电泳跑出来有长有短，6,7,8,9长度不正确？

天一湖医者

考虑引物特异性较差或者模板不纯（包括降解以及掺有别的DNA序列）如果用PCR产物做模板的话，量太大也会有这个现象，另外胶没煮好也会这样。

4 回答608 围观

问想问一下，细菌DNA pcr跑胶之后在正常的条带上方都有一整行整齐的暗暗的条带（不是拖尾）应该考虑哪些可能造成这个结果的因素

迟C迟

如果每次都有，不管是否换了样品，可能是成像系统出现了故障。如果是远离点样空端出现暗条带，可能是引物二聚。

6 回答830 围观

问rna和探针加热变性后，在冰中速冷多久合适

大草原的小灰驴

我们一般放置在冰盒中三分钟以上。时间太短作用会不充分，无法防止形成双链结构，时间太久会可能RNA不稳定容易降解掉。

7 回答2152 围观

问核酸斑点杂交杂交真空干燥的，压力有要求吗，为什么我的东西都固定不上

天一湖医者

压力一般没有要求，真空短暂干燥后用50ulTE溶液溶解沉淀。

2 回答387 围观

问核酸斑点杂交，倒掉预杂交液后，加入杂交液是只要加进去就行还是要点在点样那一面上

bamboopiggy

最好还是要点在点样那一面，那样接触比较多。

2 回答327 围观

问SLC5a2 基因突变，导致肾性尿糖和尿氨基酸，引起口干多尿，如何逆转基因/修复基因，使其恢复至之前状态。

未来9

目前基因治疗主要有三种形式：一是将正确的基因导入细胞来替代错误的突变基因；二是直接修复错误的基因，也就是常说的基因编辑；三是在体外通过基因技术修改细胞，然后把修改的细胞导入人体发挥作用。但是糖尿病的基因疗法目前仍处于动物试验阶段，尚未用于临床。

2 回答713 围观

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