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问
请教蛋白表达时如何使用溶菌酶
冷泉港蛋白
科研一般用超声裂解,比溶菌酶效果好。1.超声300W,超声3秒,停3秒,10分钟。应该会清亮了。2.每克菌体加20ml-50ml PBS3.变幅杆好像是选6号的吧
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问
逆转录机器体系忘记更改会影响后续实验结果吗
whilt-shirt
这个个人觉得影响不是很大,其实逆转录就是升温和降温的过程
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问
求问,提小鼠血RNA的话,抗凝管怎么制作呀🤔
bamboopiggy
你直接用普通抗凝管,提出白细胞来以后,再加入trizol中就可以。
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问
透射电镜-自噬
Eason老歌迷
椭圆形的是线粒体,不规则的是自噬。
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问
极容易出现非特异性扩增的序列该怎么进行测序呢?
bamboopiggy
你试试提高一下annealing temperature的温度,然后胶回收后,测浓度,再做TA克隆
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问
求助,EMSA实验,为什么加了竞争探针之后,最下面的自由探针没有了,而且好像跑不下来的样子,胶孔下面总是有一些非特异的带
水木游游
请问楼主,这个问题找到原因解决了吗
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问
简并引物扩增抗体基因后测序
Eason老歌迷
建议你测序的时候还是用两个引物双向测序。
1 回答
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问
高通量测序甲基化修饰的问题
你好几和户
m6A RNA甲基化建库测序的原理是通过抗体特异性结合m6a修饰位点,再通过免疫共沉淀反应将m6a RNA甲基化片段富集,再进行建库测序即可完成在全转录组范围的m6a位点检测。宏基因组不包含对某个特定微生物种群的靶向,即不会对微生物特定种群进行单一性测序(真菌、细菌或者病毒),而是所有微生物基因组的总和。
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问
一星期的缓冲液换了之后胶还是很乱
Eason老歌迷
你既然换了缓冲液,还是很乱说明不是缓冲液的问题,可能是你的胶没配好。
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问
跑完电泳后缓冲液为什么不是均匀的烫
Eason老歌迷
是不是电流太大了,导致的电泳液很热?我们一般温度都不高啊。
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问
为什么PCR产物跑电泳 胶很乱?
12345l6i
胶没配好,另外缓冲液也有问题,第二块胶出现倒u型,可能缓冲液浓度不对
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问
蛋白表达
whilt-shirt
有可能是未裂解完全,建议重新裂解试试
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问
WB中110KDa的蛋白怎么跑?
Eason老歌迷
配胶可以选浓度小一点的,因为你是跑大蛋白。先用50v跑,出浓缩胶后,换成120v跑。跑完转膜可以拿湿转,110属于大分子,转的时间稍微长点。效果会很好。
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问
多片段无缝克隆一直连不上怎么办?
bamboopiggy
画好组合成的质粒图,然后一个片段一个片段的对引物,一般这种情况就是引物出问题了。还有就是在连接的时候,你可以把短片段的多放一些。
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问
构建载体时候,菌落PCR有目的条带,但是测序发现不是目的片段,是怎么回事?
dxy_32za0uaq
请问最后怎么解决的呀,我也和你一样验证了前面后面和基因三种都有,但是测序就是没有结果,想问下怎么解决的,感谢🙏!
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问
EMSA实验同样的探针,为何每次跑出来,下面free probe 亮度不一样
bamboopiggy
只要是人操作,就会有差异的。只要你实验结果能说明问题,不要强求非要一致。
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问
求助大佬
Eason老歌迷
把细胞放入0.2%的PFA中,4°过夜,然后换成30%的蔗糖过夜(组织沉入瓶底即可)。放入OCT中包埋(需准备液氮瓶和包埋的小塑料盒)。切冰冻切片,-80°保存。取出切片,在室温中静置10min左右。切片放入0.2%的PFA中,冰上10min。用PBS+2mMMgCI2清洗,冰上10minX2次(500mlPBS+1ml 1M MgCl2)c将切片放入detergentrinse中,冰上10min
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问
某疾病的热点致病突变位点该如何寻找
府宅
可通过基因突变数据库如果想知道一个基因与哪些疾病有关或者某一种疾病与哪些基因有关,都可以在OMIM中查询。
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问
预测转录因子
Eason老歌迷
可以用JASPAR,也可以先用meme比对多个同源基因的启动子,找出保守motif,再用这个motif通过tomtom比对到一些已经发表的数据库,就知道可能结合的转录因子了。
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问
flox/flox小鼠与KO小鼠有什么区别啊
bamboopiggy
flox/flox小鼠与特定的cre小鼠交配,就可以得到ko小鼠,分为全身的和tissue-specific的。
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