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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
如何寻找某基因的启动子序列 以及起始密码子ATG ?
一个人L0FF
请问你的问题解决了吗,我目前也在找确定某个基因的起始密码子ATG和启动子序列,需要向你学习一下,非常感谢!
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问
同源重组的引物退火温度该如何计算
Eason老歌迷
退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~知8) 只是粗算,有时不灵,但比道较简便。或者用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好。你的合成引物的单回子上也有个Tm,减去5~8也可。
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问
是引物二聚体吗
idiotOC0P
最下面那坨边缘不清晰的是引物二聚体
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问
转录因子结合位点具体包括?
Eason老歌迷
不是啊,结合位点有很多,你可以用软件去预测。打开网址:https://jaspar.genereg.net/,在搜索框里输入转录因子NFAT,点击Search。选择一个或多个ID文件,在SCAN序列框中输入FASTA格式文件,得到27条转录因子NFAT与IL17A的结合位点,Strand -没有特殊意义,选择Strand +即可。JASPAR数据库检索出的结合位点来源于已发表的ChIP实验等,主要
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问
请教蛋白表达时如何使用溶菌酶
冷泉港蛋白
科研一般用超声裂解,比溶菌酶效果好。1.超声300W,超声3秒,停3秒,10分钟。应该会清亮了。2.每克菌体加20ml-50ml PBS3.变幅杆好像是选6号的吧
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问
逆转录机器体系忘记更改会影响后续实验结果吗
whilt-shirt
这个个人觉得影响不是很大,其实逆转录就是升温和降温的过程
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问
求问,提小鼠血RNA的话,抗凝管怎么制作呀🤔
bamboopiggy
你直接用普通抗凝管,提出白细胞来以后,再加入trizol中就可以。
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问
透射电镜-自噬
Eason老歌迷
椭圆形的是线粒体,不规则的是自噬。
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问
极容易出现非特异性扩增的序列该怎么进行测序呢?
bamboopiggy
你试试提高一下annealing temperature的温度,然后胶回收后,测浓度,再做TA克隆
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问
求助,EMSA实验,为什么加了竞争探针之后,最下面的自由探针没有了,而且好像跑不下来的样子,胶孔下面总是有一些非特异的带
水木游游
请问楼主,这个问题找到原因解决了吗
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问
简并引物扩增抗体基因后测序
Eason老歌迷
建议你测序的时候还是用两个引物双向测序。
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问
高通量测序甲基化修饰的问题
你好几和户
m6A RNA甲基化建库测序的原理是通过抗体特异性结合m6a修饰位点,再通过免疫共沉淀反应将m6a RNA甲基化片段富集,再进行建库测序即可完成在全转录组范围的m6a位点检测。宏基因组不包含对某个特定微生物种群的靶向,即不会对微生物特定种群进行单一性测序(真菌、细菌或者病毒),而是所有微生物基因组的总和。
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问
一星期的缓冲液换了之后胶还是很乱
Eason老歌迷
你既然换了缓冲液,还是很乱说明不是缓冲液的问题,可能是你的胶没配好。
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问
跑完电泳后缓冲液为什么不是均匀的烫
Eason老歌迷
是不是电流太大了,导致的电泳液很热?我们一般温度都不高啊。
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问
为什么PCR产物跑电泳 胶很乱?
12345l6i
胶没配好,另外缓冲液也有问题,第二块胶出现倒u型,可能缓冲液浓度不对
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问
蛋白表达
whilt-shirt
有可能是未裂解完全,建议重新裂解试试
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问
WB中110KDa的蛋白怎么跑?
Eason老歌迷
配胶可以选浓度小一点的,因为你是跑大蛋白。先用50v跑,出浓缩胶后,换成120v跑。跑完转膜可以拿湿转,110属于大分子,转的时间稍微长点。效果会很好。
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问
多片段无缝克隆一直连不上怎么办?
bamboopiggy
画好组合成的质粒图,然后一个片段一个片段的对引物,一般这种情况就是引物出问题了。还有就是在连接的时候,你可以把短片段的多放一些。
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问
构建载体时候,菌落PCR有目的条带,但是测序发现不是目的片段,是怎么回事?
dxy_32za0uaq
请问最后怎么解决的呀,我也和你一样验证了前面后面和基因三种都有,但是测序就是没有结果,想问下怎么解决的,感谢🙏!
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问
EMSA实验同样的探针,为何每次跑出来,下面free probe 亮度不一样
bamboopiggy
只要是人操作,就会有差异的。只要你实验结果能说明问题,不要强求非要一致。
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