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        多片段无缝克隆一直连不上怎么办?

        相关实验:🔥 分子克隆技术

        user-title

        dxy_kfbst9y3

        最近一直在做多片段无缝克隆,载体和插入片段的大小(7.6kb0.7kb2.0kb0.8kb0.7kb),怎么样都连不上,长的菌有二十个左右,但是pcr没有阳性,抽提出来也不是空载体的大小,各位有什么建议嘛

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        2 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        画好组合成的质粒图,然后一个片段一个片段的对引物,一般这种情况就是引物出问题了。还有就是在连接的时候,你可以把短片段的多放一些。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        可能是你的引物序列不正确,你可以在确认引物序列含有15 bp与载体插入区域完全一致的同源序列。也可能是因为PCR产物不纯,你可以优化PCR扩增反应以得到单一PCR产物或者换一种纯化方法,纯化您的PCR产物。

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