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        同源重组的引物退火温度该如何计算

        相关实验:DNA 琼脂糖核酸电泳

        user-title

        dxy_v1k75py9

        同源重组的引物从5端到3端分别为载体同源臂和基因特异性结合位点,请问该计算哪一段的退火温度呢?

        pcr前两轮是以基因特异性结合位点进行碱基互补配对的,第三轮开始,载体同源臂和基因特异性结合位点应该会一起结合到目标片段上吧?

        所以最终该以哪一段的退火温度为实际操作的退火温度呢?

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        2 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~知8) 只是粗算,有时不灵,但比道较简便。或者用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好。你的合成引物的单回子上也有个Tm,减去5~8也可。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        看你第三轮overlap的区域是哪里,就用哪里计算退火温度

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