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科研学霸天团，48小时有问必答

问求助🆘怎么用FITC标记细菌？可以在菌悬液里加入一定浓度的FITC，然后在菌的不同生长时期取样观察荧光情况吗？

loveliufudan

是的，您可以使用FITC（荧光异硫氰酸酯）标记细菌。以下是一种常见的方法： 1. 准备FITC溶液：将FITC溶解在适当的溶剂中（例如二甲基亚砜或甲醇）以制备FITC溶液。注意，FITC对光敏感，因此在制备和使用过程中应避光。 2. 处理细菌：收集您感兴趣的细菌样品，可以是培养物或培养基中的细菌。确保细菌处于活跃生长期，并在适当的生长条件下培养。 3. FITC标记：将FITC溶液添加到细菌悬浮液

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问治癌药物在小鼠上的安全窗口达到多大才有必要做后期研究

loveliufudan

安全窗口的大小取决于多个因素，包括药物的毒性特性、剂量和给药途径、研究目的和所需临床剂量的预估。在评估治癌药物的安全窗口时，通常会进行以下步骤： 1. 急性毒性研究：通过单次给药来评估药物在小鼠体内的急性毒性，包括观察动物的行为、体重变化、器官损伤等指标。 2. 亚慢性毒性研究：在较长的时间范围内进行多次给药，评估药物对动物的亚慢性毒性效应，例如长期给药引起的器官损伤、代谢影响等。 3. 慢性毒性

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问质粒双酶切怎么做阴性对照？

sswei

酶切反应时加各单酶分别切,两管,用同一种BUFFER,跑胶,看单切的两管是否成线性.如两管均成线性可初步判断双酶切成功. 做转化时,也要进行对照. 设4个:A.即拿双酶切的质粒产物也进行连接反应,这个对照可进一步看双酶切是否成功,如果长出克隆,说明很有可能只进行了单酶切,如没长出克隆,则证明双酶切成功,当然要保证感受态,培基,连接酶都'正常'的情况下.B.酶切过的未进行连接反应的双酶切产物,进行转

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问测CAT时，是不是测每一组酶都要用对应的煮死的酶做对照啊？

土井挞克树

是的，需要每一组酶都要用对照。

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问液氮冻融法转化农杆菌，一直转不成功怎么办，菌液pcr无条带

loveliufudan

以下是一些可能的原因和解决方法： 1. 菌液PCR无条带：如果您在进行菌液PCR时没有观察到任何条带，这可能是由于以下原因： • 菌液中没有目标DNA：确保您在菌液中加入了正确的目标DNA。您可以对目标DNA进行质粒提取或PCR扩增，并在转化试验中使用适当浓度的DNA。 • PCR条件不正确：检查您的PCR反应条件，包括引物浓度、扩增温度和循环数等。确保您使用了适当的PCR引物和条件。 • 菌液处

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问流式细胞术检测cy5

吴U4GF

请问cy5.5怎么标记纳米粒啊

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问栓剂直肠给药如何对实验大鼠进行操作？

sswei

用栓剂给药时，要时刻观察是否有滑出栓剂的问题，以免影响实验结果，可捏紧肛门保持一段时间，也可固定动物头低位状态。

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问Tricine-SDS PAGE三层胶的配方及注意事项

loveliufudan

以下是Tricine-SDS PAGE三层胶的配方和注意事项： 1. 垂直电泳缓冲液（上缓冲液和下缓冲液）： • 上缓冲液（Anode Buffer）：25 mM Tris，192 mM glycine，0.1%（w/v）SDS，pH 8.3。 • 下缓冲液（Cathode Buffer）：50 mM Tris，384 mM glycine，0.1%（w/v）SDS，pH 8.3。 2. 聚丙烯酰

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问树突细胞鉴定流式细胞术（直接测量）需要买什么抗体

loveliufudan

在树突细胞鉴定的流式细胞术中，用于确定细胞类型的抗体可以包括以下一些： 1. CD11c：这是树突细胞的标志性表面分子，用于确认细胞为树突细胞的关键标记。 2. CD80（B7-1）和CD86（B7-2）：这些共刺激分子在树突细胞表面表达，并与T细胞激活和共刺激过程密切相关。 3. MHC-2（主要组织相容性复合体类II分子）：这些分子在树突细胞中高度表达，用于呈递抗原给CD4+ T细胞。 4.

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问AAPH和ABTS原理

loveliufudan

原理如下： 1. AAPH：AAPH是一种自由基产生剂，它通过热解产生自由基，主要是氧自由基（ROO•）。在抗氧化实验中，AAPH会引发氧自由基的产生，这些自由基可以与抗氧化物质反应并被消耗。测定抗氧化能力时，添加被测试样品到含有AAPH的溶液中，然后测量在一定时间内自由基的消耗程度。抗氧化能力较强的样品会有效地消耗AAPH引发的自由基，导致自由基的减少。 2. ABTS：ABTS是一种人工合成的

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问如何设计Fish探针

土井挞克树

fish探针设计方法：1.FISH使用的探针序列来源于基因组或BAC(细菌人工染色体)DNA，包含许多重复序列。串联重复序列(Tandemrepeat)，如存在于着丝粒的α卫星DNA(SatelliteDNA)；散在重复序列(Interspersedrepeat)，如Alu家族。2.探针中的这些重复序列，在与基因组杂交时易产生非特异信号3.人类Cot-1DNAx是在杂交中常用来封闭及去除重复序列的

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问为什么稳转Gaussia luciferase的细胞系检测不到RLU？

土井挞克树

可能是转染后存在降解，一般降解发生的比较快，降解后就检测不到rlu了

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问请教酵母转化，醋酸锂转化法相关问题

土井挞克树

以下为酵母醋酸锂转化法的步骤：l.于5mlYPD液体培养基中接种酿酒酵母，300C下200rpm过夜振荡培养。2.计数过夜培养的细胞密度，以5x106个／ml的最终细胞密度接种于50mlYPD培养液。3.置300C条件下200rpm振荡培养至细胞浓度为2x107个细胞_Jml，通常须要3．5小时，该培养物的细胞足够约可用于l0次醋酸锂转化。4.离心，添加醋酸锂

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问GC-MS前处理是不是必须要冻干研磨成粉才可以提取代谢物？

土井挞克树

也可以不冻干直接用匀浆提取，但是相对来说准确度不如冻干样品

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问非靶向代谢组学实验中仪器的选择

dxy_mqg1dtg8

UPLC-Q-TOF/MS和UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS/MS都是常用的非靶向代谢组学检测仪器，它们之间的主要区别在于分离柱、检测器和质谱分析器的不同。具体如下：1. 分离柱：UPLC采用超高效液相色谱柱（Ultra Performance Liquid Chromatography），其粒径和长度均比传统的高效液相色谱柱（HPLC）小，因此分离能力更强，分离效率更高。

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问目前使用chatgpt进行降重会有问题吗？

土井挞克树

可以的，chatgpt是常用的降重方法

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问做了XPS为什么氧元素特别高？

土井挞克树

首先考虑污染了，可能是需氧类细菌的污染

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问荧光免疫层析T线条带不均匀是怎么回事

sswei

可能是包被抗原抗体膜存在问题。

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问求助🆘怎么设计实验探究荧光染料随着细菌分裂代数的荧光淬灭情况？

loveliufudan

下面是一个可能的实验设计： 1. 实验材料和设备： • 细菌培养基和培养皿 • 荧光染料 • 显微镜和荧光显微镜装置 • 计时器或时钟 2. 实验步骤： • 准备培养基：根据细菌的需求制备适当的培养基。 • 培养细菌：将细菌接种到培养基中，并根据其生长特性，在恰当的温度和环境条件下培养细菌。 • 添加荧光染料：在细菌培养基中添加适量的荧光染料，并确保荧光染料均匀分布。 • 分裂代数观察：使用显微镜

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问求RAW264.7，BMDM转染经验分享

loveliufudan

对于 RAW264.7 和 BMDM（骨髓源巨噬细胞）的转染，有几种常见的方法可供选择，包括化学转染和电转染。下面是一些转染经验分享和常用条件的建议：化学转染（使用 Lipofectamine 2000）： 1. 细胞密度：在转染前，确保细胞达到适当的密度，通常是约70-80%的细胞完全覆盖培养皿。 2. 转染试剂：按照 Lipofectamine 2000 的说明书准确配制转染试剂。注意检查试剂

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