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        求助 4T1细胞 质粒转染 有朋友用质粒和PEI转染过4T1吗?效果怎么样呢?

        相关实验:细胞转染

        user-title

        dxy_n1i3158r

        有朋友用质粒和PEI转染过4T1吗?效果怎么样呢?最近在做质粒转染,效果一直不太好,感觉4T1不太好转染

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        4 个回答

        user-title

        北洋康肽

        有帮助

        还转 4T1 细胞吗,我们的转染试剂能把转染效率提升到 90% 左右[呲牙]

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        这个确实失败率较高,质粒方面可以更换一下,增加转染效果

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        通常来说,4T1细胞对于质粒转染确实具有一定的挑战性。有研究表明,4T1细胞的转染效率相对较低,可能是由于其细胞壁和胞膜的结构、电荷等因素影响了质粒的进入。

        对于改善质粒转染效率的方法,可以考虑以下几个方面:

        1.优化转染条件:包括转染剂的种类和浓度、转染时间、细胞密度、培养基成分等参数。

        2.使用辅助转染剂:如Polybrene、Protamine等,可以帮助质粒更好地进入细胞。

        3.优化质粒质量和浓度:保证质粒质量纯度和浓度充足,避免质粒降解或过度稀释。

        4.尝试其他转染方法:如电穿孔法、基因枪法等。

        最后,建议您多尝试几种转染条件和方法,并结合检测结果进行优化,以提高质粒转染的效率。同时也可以参考一些文献报道的转染方法和实验条件,了解一下其他研究人员在类似细胞中的转染实验过程和条件,以获得更好的转染效果。

        user-title

        dxy_n1i3158ruser-title

        你好,是有文献表明4T1转染质粒困难吗?我需要一些数据去反馈给导师

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        1.感染前一天,消化4T1细胞并计数,将细胞铺于24孔板中(以便在感染前细胞达30%-50%的汇合度,37°C过夜孵化细胞。

        2. 解冻低温保存的慢病毒液,并且制备1:2病毒稀释液200µl加入细胞中。

        3.向每孔加入Polybrene达到终浓度6ug/ml,晃匀孔板,37度孵化过夜。

        4.移去含有慢病毒的培养基,加入500µundefined培养基。

        5.换液,加入300µg/ml Hygromycin(Sigma)来选择稳定感染的细胞克隆。

        6.每24h换液,300µg/ml Hygromycin(Sigma)来选择稳定感染的细胞克隆。

        维持培养。

        7.细胞逐渐由24孔板传入6孔板、6cm盘和10cm盘中100µg/ml Hygromycin维持培养。

        8. 4T1-Gluc/Mluc细胞系鉴定: 取5×104细胞,用Passive Lysis裂解液裂解,加入荧光素酶作用底物,将转染质粒的细胞与阴性,阳性对照共同进行单报告基因检测。GFP和mCherry表达通过荧光显微镜观察。

        培养条件 :置于37℃、5%CO2培养箱中,用含10%胎牛血清(FBS; Hyclone, Tauranga, New Zealand)和1%双抗(100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml链霉素,Hyclone, Logan, UT, USA)的高糖DMEM培养基培养,培养一天(密度大概80%)按照1:3的比例传代。

        细胞传代所需时间:1天/代

        筛选标记维持压力和选择压力:Hygromycin 100ug/ml 和300ug/ml 。

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