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原理：(1) PCR特点：扩增片段大小由2条引物与模板的结合位点决定；经过PCR扩增，产物以指数级数增加，达到目的片段的大量扩增。(2) Taq DNA聚合酶简化并推动了PCR的发展：水生栖热菌（Thermus aquaticus）,75OC温泉半衰期：95OC 38分钟最适温度：72OC，耐高温特性使PCR反应的特异性增加。(3) 各种来源的DNA都可以作为PCR扩增的模板DNAmRNA cDNAcDNA文库或DNA文库细胞直接煮沸(4) PCR的 ...

标准的PCR反应体系：　　　10×扩增缓冲液 　 10ul　　　4种dNTP混合物 　 各200umol/L　　　引物 　　　　 　 各10～100pmol　　　　模板DNA 　　　 　 0.1～2ug　　 　 Taq DNA聚合酶 　 2.5u　　　　Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L　　　加双或三蒸水至 　 100ulPCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+　　引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物， ...

各位大侠：本人初涉分子生物之列，现在想做一个融合蛋白，希能得到指点。问题之一：1 ccgccagatt tgaatcgcgg gacccgttgg cagaggtggc ggcggcggca tgggtgcccc61 gacgttgccc cctgcctggc agccctttct caaggaccac cgcatctcta cattcaagaa121 ctggcccttc ttggagggct gcgcctgcac cccggagcgg atggccgagg ctggc ...

A. Pilot error hypothesis.Background:This is the most common problem with new people. It frequently happens a couple of weeks after someone is "trained" and when they start to work independently.Symptoms:- i) Other people in the lab have the same primers working on the same type of material, using the ...

A subset of SNPs that will represent the majority (90%) of the observed haplotypes but with minimal reduction in power to detect associations determined in earlier will be utilized for this aspect of the proposal. Multiplex and multiplex minisequencing will be utilized to genotype these SNPs ...

刚刚接触RT-PCR实验,现在遇到一些问题.特向各位高人请教.我做的是关于大鼠erg,mink,KvLQT的基因表达,引物是老板按照文献给的,源自于Circulation(2000;101:2007-2014),作者是日本人.非常困惑的是没有GENEBANK的NO,对于这些引物我非常想核对,但是无从谈起.硬着头皮做了,可是发现跑出的条带不对头,与Marker比较都大了许多,erg大约是900左右,这是不是就是所谓的基因 ...

老板给定了一课题，希望能通过定量PCR来检测一病原真菌对药剂的抗药性。该病原真菌的抗药性由其β-维管蛋白基因的881位的点突变引起。该菌抗药性β-维管蛋白基因序列为：ATGCGTGAGATTGTGAGTGTTTTCCTCTGACCTCTAACTTCAAGCTGTTGCATGCGTTGAGCTTGTGTTTTGTGCCCTTGATTGTACCCCGCCGGGCGGTGGCAGCTCAACAACAATGCA ...

因工作需要，想查一下最原始的有关PCR论文，在PubMed上，用（“Polymerase chain reaction”）搜索了1984-1987年的论文，结果有11篇，其中最早的在1986年发表，共3篇，具体如下：9: Saiki RK, Bugawan TL, Horn GT, Mullis KB, Erlich HA. Related Articles, LinksAnalysis of enzymatically amplified beta-globin and HLA-DQ alpha DNA with ...

Reverse Tranase-PCRThis method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center.The following is a great RT-PCR protocol developed by Ignacio Rodriguez at the National Eye Institue, NIH.ReferencesRaineri, I., Moroni, C. and Senn, H.P. (1991).Improved e ...

我要克隆一全长CDNA，设计引物如下sense:TCTCGGACCATGTCTCCCGCCCCA（起于104）antisense:CTA TCA GAC CTT GTC CAG CAG GGA（1841－1861）cDNA全长为：1 agttcagtgc ctaccgaaga caaaggcgcc ccgagggagt ggcggtgcga ccccagggcg61 tgggcccggc cgcggagccc acactgcccg gctgacccgg tggtctcgga cc ...

　 有谁能帮我解决相对定量时内参和目标产物的扩增效率问题？我用的反应体系为50ul：１０＊PCR buffer 1 ＊(终浓度）　　　　　　　　　　２mmol/l　dNTP 0.2mmol/l每种TaQnase 5U/IU 1U/50ul25mmol/l Mgcl2 2.5mmol/lintel reference Primer 1F 1umol/l1R 1umol/lMGB probe 0.25umol/ltarget Primer 1F 1umol/l1R 1umol/lMGB probe 0.25umol/lTemplate 0 ...

我设计了一对引物，用几个软件评价不一，哪位高手能否帮我检测一下？PA:ATCAAGCTTCACAGTCAGCCGCATGGPB:GCTTCTAGACCTCTGGCTGGCTTCTCAC我的序列：gcccgtacac accgtgtgct gggacacccc acagtcagcc gcatggctcc cctgtgcccc61 agcccctggc tccctctgtt gatcccggcc cctgctccag gcctcactgt gcaac ...

我作RT-PCR, 这个引物实在是设计不好，是TOPO II ALPHA其mRNA如下：1 aggttcaagt ggagctctcc taaccgacgc gcgtctgtgg agaagcggct tggtcggggg61 tggtctcgtg gggtcctgcc tgtttagtcg ctttcagggt tcttgagccc cttcacgacc121 gtcaccatgg aagtgtcacc attgcagcct gtaaatgaaa atatgcaagt caacaa ...

http://fileho.com/download/a42426471683/PCR-TECHNOLOGY-Current-Innovations--SECOND-EDITION.rar.htmlPCR Technology: Current Innovations, Second Edition is a fundamental reference for scientists new to PCR technology and a source of up-to-date applicati ...

Protocol for competitive RT-PCRFor quantifying mRNA, we use a competitive RT-PCR protocol with internal standard RNAs. These are added in a defined quantity to the RNA sample prior to the RT reaction. The resulting standard cDNA is coamplified with the same primers as the endogenous target seq ...

的2009年1-3月全文，持续更新（3月11日更新一期）《科学》09年3月06日出版pdf全文http://www.rayfile.com/files/babebccc-0dd3-11de-9021-0019d11a795f/重新整理一下，方便大家下载3月08日最新更新三期《自然》09年3月05日出版pdf全文http://www.rayfile.com/files/40b4522e-0b25-11de-b280-0014221 ...

我做heparanaser的RT-PCR,请各位帮助验证引物cDNA序列为:1 atgctgctgc gctcgaagcc tgcgctgccg ccgccgctgc tgatgctgct gctcctgggg61 ccgctgggtc ccctctcccc tggcgccctg ccccgacctg cgcaagcaca gcaggacgtc121 gtggacctgg acttcttcac ccaggagccg ctgcacctgg tgagcccctc gttcc ...

我要检测一个受体蛋白，提取的脑组织，Trizol提取组织RNA，加异丙醇离心后能见到明显的沉淀，按照TakaRa 的RNA LA PCR KIT(AMV) VER.1.1说明书操作，在逆转录后PCR不再加dNTP。逆转录后PCR用actin引物能模糊扩出一些东西，但有两条以上的带(第二次都快扩成100bpMARKER了！）。目的片段干干净净什么都没有！目的片断的引物一个是外国文献上的，一个 是自己设计的，都没有扩出来。小弟还菜，想大家给点建 ...

丁香园是一个非营利的学术科技网站，其今后发展定位是公益性学术科技类型网站，我们在“独立，非营利，纯学术”的思想指导下来建立和发展丁香园，主要目的是希望继传统知识交流平台（报纸，杂志，期刊等）之后，利用现在成熟和发达的互联网，使之成为一个承载和传播先进科技思想的新平台。这个平台与传统知识交流平台相比，具有如下特点：获取信息速度快，范围广，信息量大，互动性强，成本低。这几个特性是传统知识交流平台所不具备的。目前由于对互联网 ...

深圳市生科源技术有限公司PCR项目客户问题手册（载录）1．何谓PCR？PCR是多聚酶链式反应(Polymerase ChainReaction) 缩写，是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。是一种选择性体外扩增DNA或Rundefined*段的方法，能使极少量的基因组DNA或RNA样品中的特定基因片段，在短短几小时内扩增上百万倍。2．实时荧光PCR和普通PCR的区别？普通PCR技术：对反应的终产物进行半定量分析或定性分析。实时荧光 ...