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        我的一对引物扩出了别的东西? 怎么回事a ???

        丁香园论坛

        1624
        用的是反转录的CDNA为模板3‘RACE方法扩增一未知基因的全长
        利用已知序列设计上游引物 ,下游为试剂盒提供的Adaptor PRIMER
        扩增结果有杂带 但500bp左右目的条带很亮 纯化后测序结果是另一基因
        与我已知序列BLAST 2 SEQUENCE 并无相似性 ?????
        到底是怎么回事啊???
        引物同源性在BLAST比对的结果怎么分析 看不大懂 都是100%一致的
        上游CGGTGAGAAGTTCCGTTATG
        3’Adaptor primer ctgatctagaggtaccggatcc

        已知序列GTACCGATGACGATGATGTCGTCATCAACGCCTTCAAGGCCTTCGACAACAACGGCCGAA
        TTGACGGTGAGAAGTTCCGTTATGCCCTCACTCACTGGGGTCAGGAAAAGTTCCCCGAGG
        ATGAGGTTGACGATGCCTTCGACCAGATGATCGTTGACGATAAGGGCTTCATCGACACCG
        CTGCCCTGATTGCCATGCTCACCGGTTCCGAGGAGGGAGAGGAAGAATAAACGGATTCTT
        CACGAACCACCAAAAAAACCCAACCACTTCTATTTATTTAAAGAACTCTTACTTGTAAAC
        AACATCTACAAAGAACAAGCAGTGACAACAACAACAACAACAACAATACGGAGAACATCT
        TCATGTAACCACAATTCCATTTGCTTACATCATCTGATTCTAAATTATTACTTTTATTTT
        CTATGATAAGACATGAATTTTAAGCTTTAAGGAAAATAAAGTTTTTTNAAAAAATCTTTN
        NAANTG

        测序结果

        CGGTGAGAAGTTCCGTTATGTATTATCTATAGGAGCTGTATTTGCTATTATAGCAGGATTTATTCACTGATATCCTTTATTAACAGGATTAGTAATGAACCCTACATGATTAAAGATTCAATTTACTATTATATTTATTGGAGTAAATTTAACATTTTTCCCACAACATTTCTTAGGATTAGCAGGAATACCACGACGATATTCTGATTTTCCAGATAGTTACTTAGCATGAAATATTGTTTCATCATTAGGTAGAACAATTTCATTATTTGGAATTGTATTCTTTTTATTTATTATTTGAGAAAGTATAATTTCTCAACGAACACCTTCATTCCCTATACAATTATCATCATCAATTGAATGATATCATACTCTTCCACCTGCAGAACATACATATGCAGAACTTCCATTATTATCATCTAATTTAAAAAAAAAAAAAAAAAGAGAAAAAAAAAAAGGATCCGGTACCTCTAGATCAG

        help
        都扩了好久了
        多谢
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